实验十四 样品中菌落总数的检测.

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1、实验十四样品中菌落总数的检测一、目的要求学习并掌握样品中菌落总数（平板菌落计数）的原理和方法。二、实验材料1.样品：鲜啤酒2.培养基:营养琼脂培养基3.设备仪器:10ml无菌吸管1支、1ml无菌吸管4支、无菌带塞空试管3支、无菌空培养皿9套、酒精灯、试管架、无菌生理盐水、玻璃珠、温箱36℃±1℃、天平等。三、基本原理菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1克或1毫升检样中所含细菌菌落的总数。菌落总数主要作为制定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。每种细菌

2、都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、pH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法去作细菌菌落总数的测定。所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。四、检验程序菌落总数的检验程序如下：五、操作步骤1．检样稀释及培养(1)以无菌操作，将检样25g(或25ml)剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨作成1:10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释

3、后，最好置灭菌均质器中以8000～10000r/min的速度处理1分钟，作成1:10的均匀稀释液。(2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml时，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管混合均匀，作成1:100的稀释液。(3)另取1ml灭菌吸管，按上面各项操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支灭菌吸管。(4)根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个

4、稀释度作两个平皿。(5)稀释浓移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46℃±1℃水浴保温)注入平皿约20～25ml，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌皿内作空白对照。(6)待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养24土2h(肉、水产、乳和蛋品为48±2h)取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克(或毫升)样品所含菌落总数。2．菌落计数方法作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。3．菌落计

5、数的报告(1)平板菌落数的选择选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平夜的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。(2)稀释度的选择①应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见表例1)。②若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比如何来决定，若其比值小于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小

6、的数字(见表例2及3)。③若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表例4)④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表例5)。⑤若所有稀释度均无菌落生长，则以小于(<)1乘以最低稀释倍数报告之(见表例6)。⑥若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表例7)。(3)菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数报告；大于100时，采用二位有效数字，在二位有

7、效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示(见表"报告方式"栏)。六、结果将实验测出的样品数据以报表方式报告结果。稀释度选择及菌落报告方式例次稀释液及菌落数两稀释液之比菌落总数个/g或个/ml报告方式个/g或个/ml10-110-210-31多不可计16420－164016000或1.6×10-42多不可计295461．63775038000或3.8×0-43多不可计271602．22710027000或2.7×0-44多不可计多不可计313－313000310000或3.1×10-5527115－

8、27270或2.7×10-26000－﹤1×10﹤107多不可计30512－3050031000或3.1×10-4实验十五样品中大肠菌群的检验一、目的要求学习大肠菌群菌数的检测原