三叶因子蛋白在毕赤酵母gs115中高效表达 毕业论文

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1、本科生毕业论文（设计）题目：三叶因子蛋白在毕赤酵母GS115中高效表达姓名xxx专业xxx年级、班级2008级部、系(院)xxxxx指导教师姓名专业技术职务xxx副教授2012年6月4日目录中文摘要…………………………………………………………………………………1英文摘要…………………………………………………………………………………21引言……………………………………………………………………………………32材料……………………………………………………………………………………42.1材料……………………………………………………………………………

2、……42.2主要仪器……………………………………………………………………………53方法……………………………………………………………………………………63.1构建重组质粒………………………………………………………………………63.2工程菌株在试管中的培养…………………………………………………………63.3诱导培养……………………………………………………………………………63.4SDS-PAGE电泳检测重组蛋白……………………………………………………73.5筛选高效表达菌株　…………………………………………………………………84结果……………

3、………………………………………………………………………94.1三叶因子蛋白表达菌株的筛选……………………………………………………94.2三叶因子蛋白的诱导表达…………………………………………………………95讨论……………………………………………………………………………………116结论…………………………………………………………………………………13参考文献………………………………………………………………………………14附图表…………………………………………………………………………………15综述………………………………………………………………

4、……………………17致谢……………………………………………………………………………………21摘要目的：三叶因子蛋白在巴斯德毕赤酵母菌株GS115中摇瓶培养并甲醇诱导表达，筛选出三叶因子蛋白高效表达的菌株。方法：以pPICZα为载体，构建三叶因子蛋白真核表达质粒，经SacI线性化后电转化毕赤酵母GS115感受态细胞，涂布MD平板，得到70个转化子。分别接种到试管中恒温摇动培养24h，再接种到摇瓶BMGY培养基中振荡培养36h，最后转接到BMMY培养基，诱导培养96h，分别在培养24h、48h、72h和96h四个时间点补加甲醇进行诱导表达，SD

5、S-PAGE电泳检测目的蛋白表达情况，从而筛选出三叶因子蛋白高效表达的菌株。筛选出的工程菌株经上述方法诱导培养，摸索三叶因子蛋白在毕赤酵母GS115诱导表达的最适时间。结果：离心培养液，收集上清进行SDS-PAGE电泳，电泳图谱上能清楚的看到目的蛋白表达条带。结论：三叶因子蛋白在巴斯德毕赤酵母菌株GS115获得高效表达。并筛选出高效表达三叶因子蛋白的工程菌株，为对三叶因子蛋白进一步功能研究奠定了基础。关键词：巴斯德毕赤酵母菌株GS115；三叶因子蛋白；甲醇；SDS-PAGE电泳。20AbstractObjective:Trefoilfact

6、orproteininPichiapastorisyeaststrainGS115shakeflasksandmethanolinduction,screeningouthigh-levelexpressionoftrefoilfactorproteinstrains.Methods:TopPICZαtrefoilfactorproteineukaryoticexpressionplasmid,theSacIlinearizedpowerintoPichiapastorisGS115competentcellscoatingtheMDpla

7、tes,70transformants.Wereinoculatedwithcultured24hthermostaticshakingthetesttube,andtheninoculatedintoashakeflaskBMGYmediuminshakingculture36h,andfinallytransferredtoBMMYmediumforinduction96h,respectively,incultured24h,48h,72hand96hfourDianbuplusmethanolinducibleexpressiono

8、ftargetproteinexpressionbySDS-PAGEelectrophoresis,whichscreenedthestrainsofhigh-levelexpr