水泡性口炎病毒在草鱼肾细胞中地复制和病变效应

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1、水泡性口炎病毒在草鱼肾细胞中的复制和病变效应摘要：目的观察水泡性口炎病毒（Vesicularstomatitisvirus,VSV）感染草鱼肾细胞（CIK细胞）所引起细胞病变效应并检测其在细胞中的复制。方法用VSV病毒印第安纳（VSVIndiana）株感染CIK细胞，分别在12h、24h、36h观察病变效应。当出现大范围的细胞病变时，提取病毒RNA，通过RT-PCR方法检测病毒在细胞中的复制。结果受VSV病毒感染后的CIK细胞圆缩、聚集、脱落，形成包涵体，随着时间的延长该现象逐渐加剧。RT-PC

2、R结果显示出现了预期的200bp左右的条带。结论VSV病毒引起了CIK细胞的病变，并在CIK细胞中进行了复制。关键词：VSV病毒，CIK细胞，病变效应，复制VesicularStomatitisVirusinCtenopharyngodonIdellusKidneyCellsReplicationandCytopathicEffect06092204GAOXia-Ting(QiuzhenSchoolofHuzhouTeachersCollege,Huzhou313000)Abstract:Obj

3、ectiveWeobservedcytopathiceffectinCtenopharyngodonidelluskidneycells(CIKcells)inducedbyVesicularstomatitisvirus(VSV)anddetectedVSV’sreplicationinit.MethodsCIKcellswereinfectedbyVSVIndianastrains.After12h,24h,36h,thecellcytopathiceffectwasobserved.Whe

4、nawiderangeofcytopathiceffectappeared,thevirus’sRNAwouldbeextractedanddetectedbyRT-PCR.ResultsCIKcellswithVSVbecameroundshrinkage,gottogether,shaded,andformedinclusionbody.Withtheextensionoftime，itincreased.RT-PCRresultshowedthattheexpectedbandsof200

5、bpwereamplifiedwithtemplatesofvirus’sRNA.ConclusionCytopathiceffectappearedinCIKcellswithVSV.AndVSVcouldreproduceinCIKcells.Keywords:VSV,CIKcells,cytopathiceffect,replication目录1引言………………………………………………………………………………………12实验材料和方法…………………………………………………………………………2

6、2.1材料…………………………………………………………………………………22.1.1实验细胞2.1.2主要化学药品和试剂2.1.3主要仪器与设备2.1.4试剂配制2.2方法与步骤…………………………………………………………………………42.2.1草鱼的肾细胞(CIK细胞)培养2.2.2VSV病毒的复壮与效价检测2.2.3细胞病变效应2.2.4病毒RNA提取及RT-PCR测定草鱼肾细胞(CIK细胞)中VSV的复制2.2.5空斑实验3结果与分析…………………………………………………………………………

7、……103.1正常草鱼的肾细胞（CIK细胞）培养特征…………………………………………113.2水泡性口炎病毒（VSV病毒）的复壮……………………………………………113.3VSV病毒感染草鱼肾细胞（CIK细胞）不同时间后产生的细胞病变效应……113.4RT-PCR检测VSV病毒在CIK细胞中的复制…………………………………123.5空斑试验……………………………………………………………………………134讨论………………………………………………………………………………………134.1VSV病毒对不

8、同细胞系引起病变效应……………………………………………134.2VSV病毒对Vero细胞、3T3细胞、CIK细胞的空斑实验结果的比较…………144.3VSV病毒的检测方法………………………………………………………………155总结与展望………………………………………………………………………………15参考文献………………………………………………………………………………16致谢………………………………………………………………………………171.引言VSV病毒为弹状病毒科（Rhabdoviridae）,