小鼠骨髓细胞染色体制备与观察

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1、小鼠骨髓细胞染色体制备与观察生23李天奇20120124151.实验目的了解对动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集，低渗，滴片等技术手段，观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。2.实验原理动物的骨髓是重要的造血器官，通过细胞分裂不断补充体内的需求，通过将秋水仙素注射到动物的腹腔内，可通过转运到骨髓，使得其正在分裂的细胞不能形成纺锤体而停留在中期从而制成细胞学标本。而制备优良的细胞学标本是进一步开展染色体分带，组型分析和原位杂交的前提。3.实验用具及材料解剖用具，离心机，显微镜，低渗液，固定液，秋水仙素溶液，改良苯酚品红染液4.实验方法及步骤腹腔注射秋水

2、仙素溶液将细胞悬液在尽可能高的地方滴到预冷的载玻片上室温下自然晾干，后滴加染色液染色10~15min取材：断颈法处死,去股骨，低渗液冲淋得到冲洗液1000r/min离心lOmin弄上清液，留与沉淀等量的上清液制备细胞悬液染色结束后用清水轻轻的冲去浮色，室温下自然晾干吹打并置于恒温水浴锅中20Min,加入固定液，吹打并固定lOmin1500r/min离心lOmin后弃上清液,再加入固定液lml,固定lOmin镜检观察好的分裂相区域5.结果与讨论照片附于最后在照片中可以看到在中下方有一个比较清晰的由小于号性状的短棒组成的聚集体，较外侧的短棒之I'可分离较开，而较内侧的短

3、棒，尤其是左上和右下区域的短棒聚集程度较大,短棒之间有重叠，在一定程度上加大了统计短棒数目的难度。在照片的下方和右下方有一些圆形的染色后的物质，影响了对照片的观察情况。根据短棒的长度，性状和数量可以推断出这些短棒就是处于中期的染色体，将染色体染色较深的区域视为发生了两个染色体的重叠，在某些不明显的区域通过全部计算或者全部不计算的方式，经过统计的染色体总计为37~42条。对于照片中出现的圆形的染色后的物质，其内部并没有出现短棒状的物质，因此我判断其并不是没有分來的细胞，而更可能是由于使用清水轻轻冲洗的时候力度过轻而没有完全冲去的染色剂造成的污染。6•思考与感悟低渗液的

4、作用和使用的注意事项：低渗液可以利用反渗透作用使得细胞吸水膨胀而使得染色体之间分离程度较大，便于固定后进行观察和计数。低渗的程度是需要注意的，低渗程度过小会使得染色体分离程度较小而无法清晰进行观察和计数，而低渗程度过大则会导致细胞直接吸水膨胀而破裂，很难观察到比较完整的染色体核型。在低渗的过程中应该保证细胞分布较为均匀，使得低渗作用在每一个细胞上面都比较均等，而防止局部低渗程度过小或者过大的现象的出现。尽量高处滴下在预冷的载玻片：尽量高处可以保证液滴在落下吋会有一个较高的速度从而在落在载玻片上吋会有一个比较好的冲击而造成的分散作用，而预冷的载玻片会使得液滴在接触的一

5、瞬间急剧的收缩而炸裂,对于液滴在载玻片上的分散作用有一个加强的作用。而液滴的分散作用越强，染色体Z间相互重叠的可能性就会越低，便于对染色体进行观察和计数。视野中具有过多染色体的情况：对于这种情况的出现，可能的原因有很多。1.由于高度不够高或者载玻片在空气中放置的时间过长而使得预冷的效果不理想，这些都使得液滴在滴落下来后撞击载玻片的时候的分散效果不明显而导致没有完全分开2.由于在制备细胞悬液的时候上清液留下的过少而使得细胞悬液的浓度过高导致出现视野中染色体过多甚至相互重叠的现象。影响实验结果的关键因素：首先需要找准小鼠的股骨，这是完成实验的最为关键的因素。其次就是令染

6、色体在载玻片上可以均匀的分开，而没有相互之间的重叠。要完成这一点就需耍在滴片的时候注意高度要尽量高，预冷的载破片取出后尽快使用，制备细胞悬液的时候控制好预留上清液的体积而使得细胞悬液的浓度不会过高。关于油镜十分钟成像考试：我不得不说1号显微镜实在是太坑人了。可能是由于之前同学的误操作或者仪器本身的原因,1号显微镜的粗准焦螺旋是坏的，无法下降到正常观察的高度。我在利用4倍镜观察的过程屮，首先将粗准焦螺旋降至最低，但是发现没能清晰成像，之后缓慢上调粗准焦螺旋，发现依然无法准确对焦。时间就这么过去了五分钟。之后我发现这个粗准焦螺旋的调节范围要比我记忆中的感觉小了很多，而后

7、我观察了一下我旁边的2号显微镜，2号显微镜的成像位置要比我的粗准焦螺旋的可以调节到的最低处更低一些。这时我才发现是粗准焦螺旋出了问题,只好在粗准焦螺旋的最低处快速的下调细准焦螺旋來完成对焦。虽然最后还是在考试的时间内匆忙完成了显微拍照，可是由于初期故障排查占用的时间较多，没能找到最理想的染色体核型图。照片如下: