实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察

实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察

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时间:2019-11-23

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1、遗传实验实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法,掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。利用显微照相技术对所得切片进行照相。二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。因此通过染色体分析,可以了解某一物种最基本的遗传指标。进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织,如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。如将秋水仙素注射到动物的腹腔内,经肠系膜吸收并可转运到骨髓,结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体,使得染色体

2、停在中期状态,经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。这种制片方法是属于侵害性的,因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓,在临床上用于一些血液疾病的研究分析。对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片,方法基本一样。人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。三、实验用具及材料实验材料:体重20克左右的小鼠一只实验试剂:0.075mKCl低渗液、固定液(甲醇:醋酸=3:1)、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料:恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2

3、支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液:在做实验前2~3小时,对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4%的秋水仙素注射。2取材:实验时,用断颈法迅速将小鼠处死,通过解剖取出股骨,用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升,将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓,使冲洗液从股骨的另一端流出。收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。3低渗:用吸管将冲洗液吹打几次,然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。4固定:之后取出并加1ml的固定

4、液,吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。5离心:然后将1000rpm离心10分钟,弃去上清。6再固定:加入固定液继续固定10分钟(先吹打,再放入恒温水浴槽)。7离心:再1000rpm的速度离心10分钟。弃去上清,8制备细胞悬液:离心结束弃上清,最后留大约与沉淀等量的上清液,9滴冰片:从冰箱里取出预冷的载玻片4块并排,手持吸管在载玻片上方向下滴片。10干燥:让其自然晾干。11染色:用改良苯酚品红溶液染色10分钟左右。12去浮色:清水冲洗,风干。13镜检:先用低倍镜找到一好的分裂相区域,然后转用高倍镜观察。14观察和

5、照相:用油镜观察,并选取良好的视野照相。五、结果与讨论1.观察结果在考试的10分钟内拍摄了五张照片。遗传实验我使用的是0号机,由于前面已经有人用过,所以没有太考虑图像设置的问题,结果拿到结果才发现,0号机的图片普遍偏小,放大就模糊了。在拍照的时候,其实是调节清楚了的。所以,选择同组另一个同学的图片进行分析,如下:图一:经秋水仙素处理的小鼠(Musmusculus)骨髓细胞染色体照片M≥100×10倍(油镜,数码相机光学变焦)1)染色体计数可以看到染色体形态很清楚,细胞膜已经破裂所以边缘不是圆形,第一张染色体有交叉和重叠,

6、只能判断数目为391,第二张有些模糊,但染色体分得更开,仔细辨认可以看出是40条染色体。查资料得小鼠染色体数目为40,与结果相符。2)照片质量。这是我从同组同学照片里挑出的一张,就制片而言,第一张杂质更多,特别是在要观察的细胞上有一点污渍,不是特别理想;第二张效果要好一些,染色体分得比较开便于计数,旁边的细胞虽然紧挨但是不影响计数和观察,视野里没有太多杂质,尤其是要观察的区域很干净。2.实验讨论1)影响实验结果的重要步骤:(1)秋水仙素的注射虽然这一步不是我们完成的,但是它对于本次实验至关重要,如果没有秋水仙素使遗传实验

7、正在分裂的细胞不能形成纺锤体,使得染色体停在中期状态,因为细胞分裂中期在整个分裂期中占的比例不大,我们就很难得到那么多分裂中期的细胞,也就难以观察。(2)取骨取骨可参照人的大腿骨位置,而不是主观地判断其大小,取骨后一定要把肌肉除净,否则最后的制片效果会受到影响。(3)低渗分析我们装片分散不够好的原因,我认为主要问题就出在低渗上。低渗液可以使细胞充分吸水膨胀而不破裂,从而一直保持在胀得很大而又没有破裂的状态。进而使得细胞内的中期染色体就能够足够分散开来,从而使得经固定等步骤后仍然处于膨胀状态。之后经过滴片时的摔打和骤降温过

8、程,使细胞很快破碎,染色体进一步分散开。如果细胞低渗处理不够,在细胞从高处掉下也无法摔碎,染色体将难以观察。(4)滴片经过实践,我们认为吴老师说得很对,越高越好,在我们可达到高度范围内,基本不用担心染色体摔碎的问题。比较了我们的片子和个子高的同学的片子,我们更加确信了这一结论。(我们都是站着往地上滴片的。)六、实验小

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