遗传学实验报告五小鼠骨髓细胞染色体制备及观察

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1、遗传学实验报告五小鼠骨髓细胞染色体制备及观察2009012337生92盛心磊实验日期：20□年4月7日一、实验目的1.了解和常握使用小鼠骨髄细胞进行染色体制片的基本原理和实验方法。特别是学会并理解小鼠解剖收集骨髄细胞，低渗液处理以及滴片等关键实验技术，同吋巩固和提高显微镜操作技术。2.在掌握上述技能的基础上，完成小鼠骨髄细胞染色体滴片的制作和观察。注意细胞内染色体的形态和结构特点，从而更为深入地认识动物细胞的染色体。3.镜检吋，在所制备滴片中找到染色体排列分散而且染色体形态清晰的细胞，进行染色体计数，并与文献数

2、据相互印证。图谱。二、实验原理1.显微摄影技术2.各种药剂对小鼠细胞的作用三、实验材料及仪器1.实验用具：显微镜(Nikon,YS-100型)，显微摄影系统，改良苯酚品红染液，低渗液(即0.075MKCI)、固定液(甲醇、醋酸二者体积比3:1),解剖剪，注射器，离心机(Sigma)，恒温水浴锅，滴管，银子，离心管，烧杯，载玻片，盖玻片，镜油，搪瓷盘。2.实验材料：小鼠(Musmusculus)四、实验方法及步骤1.小鼠腹腔注射秋水仙素溶液：根据小鼠的体重注射相应体积的秋水仙素，处理2-3小吋以上。此步骤由助教代

3、做，感谢。2.取材：将处理后的小鼠放到解剖盘上，用断颈法迅速将小鼠处死。解剖后将其两支股骨取出，用解剖剪将附着在股骨上的肉剥离干净。用解剖剪将股骨头的两端剪开，暴露出骨髄腔。用注射器吸取已经提前在37°C下温育的低渗液共2.5mL,将针头插入骨髄腔中冲洗骨髄。最后将两根股骨的冲洗液汇集到同一个5mL刻度离心管内，使冲洗液达到5mLo3.低渗用吸管将冲洗液吹打均匀，然后把离心管放在37°C的恒温水浴锅中低渗20mino4.2次固定和2次离心：低渗结束后将离心管取出，加入ImL固定液，吹打均匀后放到37°C水浴锅中

4、固定lOmino之后在1200rpm离心lOmino离心后弃上清，加入固定液ImL,吹打均匀后在37°C下再固定lOmino之后再次在1200rpm离心10mino5.制备细胞悬液：离心后弃上清，小心不要将沉淀悬起。最后留约为沉淀量5倍的上清液，用吸管吹打成细胞悬液。6.滴片：从冰箱或冰盒内取出放在乙醇中预冷的载玻片，擦干。在地面上铺报纸，将4张载玻片并排摆在一起，将细胞悬液用吸管在载玻片上方约0.5m处向下滴片。(此处越高越好)7.干燥，染色，去浮色：在室温下将载玻片晾干后在载玻片上滴加改良苯酚品红染液，染色

5、10-15mino染色结束后用清水将染料轻轻冲去，晾干。8.镜检：用4倍物镜找到细胞密集的区域。换成40倍物镜找到分散较好，染色体清晰的细胞置于视野中心，用记号笔于载玻片上标记好视野中心，以利于下一步显微摄影。9.显微摄影：根据前述标记的坐标，在40倍物镜下定位细胞，滴加镜油，转换至100倍物镜，利用显微摄影系统对视野中细胞进行拍照，保存数据，本次实验进行操作测试,共有记录吋I'可10mino10.收拾仪器和材料：将仪器、用具和材料收拾整齐，将桌血清理干净，特别注意擦干净物镜上的镜油。实验现象及分析五、实验结果

6、和分析显微摄影结果如下图所示Figure].小鼠骨髓细胞染色体（10x100倍，改良苯酚品红染液）结果分析：如Figure」•所示，小鼠骨髄细胞分布在载玻片上，染色体相对分散、清晰，利于观察。图屮黑色箭头所示的细胞内可见经染色的骨髓细胞染色体，处于有丝分裂小期，此时每条染色体含有2条在着丝粒处相连的姊妹染色单体。一般而言，中期染色体应较整齐地排列在纺锤体屮部，但图小染色体较分散，这主要是低渗处理、滴片高度、低温等因素造成的。由于Figure」小细胞染色分散情况不是很理想，因此计数存在一定困难。可以辨认的染色体条

7、数约十余条，估计总数越20条左右。查阅文献可知，正常二倍体小鼠的体细胞染色体条数为2n=40,如图figure.2所示。1011(1naanOHAOnnmionMlnoHOAancnoMA19XYFigure.2小鼠的20对染色体figure.33号机上其他同学的实验结果对比我的实验结果和其他小组成员的实验结果，可以发现明显的不同：首先，照片的亮度不够。其次我的照片中H的细胞周围还冇许多其他细胞，说明分散效果欠佳。最为关键的是，我的照片中细胞的染色体没冇很好的分散，影响了观察和计数。从figure.3中可以清晰

8、得看到40条染色体，且染色体形态保持较为完整，可以用來进行核型分析。实验反思：由上图所示，染色体分散的情况并不是非常的好，有部分的染色体重叠。而其他细胞的情况更为糟糕，大部分细胞的染色体都没有充分分散开来。此外，本次实验中还存在着单位面积里细胞数目过多的问题。在整个过程中，有以下步骤对于以上的现象起着关键作用：低渗、固定、滴片、低温。低渗：使细胞膨胀，使细胞涨裂的时候染色体更好得分开。