烯效唑时间分辨免疫分析方法研究

《烯效唑时间分辨免疫分析方法研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、烯效哇时间分辨免疫分析方法研究烯效哩时间分辨免疫分析方法研究摘要：基于多克隆抗体建立了烯效I座的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)关键词：烯效呼；多克隆抗体；时间分辨免疫分析Time-resolvedFluoroimmunoassayfortheDetectionoftheUniconazoleHONGXial,2*,XINGHai-long2,WANGChenchen2(1.SchooloftheEnvironmentandSafetyEngineering,JiangsuUniversity,Zhenjiang2120

2、13,Jiangsu,China；2.JiangsuwisescieneeandtechnologydevelopmentCo.LTD,Zhenjiang212009,Jiangsu,China)Abstract：Asensitivetime-resolvedfluoroimmunoassay(TRFIA)basedonpolyclonalantibodyfordetectionofuniconazolewasdeveloped.Ahaptenwassynthesizedandconjugatedwithovalbumin

3、(OVA)asthecoatingantigen.Thecoatingantigenwascoatedbyphysicaladsorptionontoa96wellmicrotitreplate,whichwasthencompetedwithuniconazoleinthesampleforlimitedquantityofanti-uniconazoleantibodylabeledbyEu3+・Uniconazoleinthesamplescouldbedeterminedbydirectcompetitionmet

4、hod.Atspikeddifferentlevels(0.05〜0.5mg/kginwaterandsoil)recoveriesofuniconazolewerefrom80.4%〜116.8%,withCVof2.6%〜8.7%.TheTRFIAcouldbeaconvenienttoolformonitoringuniconazoleresiduesinenvironmentandfoodsamples.Keywords：uniconazole；polyclonalantibody；TRFIA烯效醴，属三I坐类化合

5、物，是80年代日本住友化学公司推出的高活性的植物生长延缓剂和杀菌剂。烯效哩延缓作物生长的作用机制在于它能有效的抑制植物体内赤霉素(GA)的生物合成，减少体内乙烯含量，增加细胞分裂素(CTK)含量，提高体内CTK/IAA的比例，从而使这些内源激素调控的生理效应发生相应的变化［1］。烯效卩坐常用于大FH作物、果树、蔬菜、烟草、花卉等众多植物，活性高于多效卩坐，同时毒性较低，被广泛用于农业、园艺植物&产中［2］。随着人们对环境与食品安全关注程度逐渐加大，迫切需要建立快速灵敏的检测烯效呼残留的分析方法。烯效呼残留测定方法主要是高效

6、液相色谱(HPLC)［3］和气相色谱(GC)［4］,这些方法前处理比较繁琐，检测结果受样品净化、浓缩等步骤的影响，不适合进行批量样品的快速检测，而免疫学技术在农药残留分析和环境监测中的应用越来越深入，已成为农药残留分析的重要方法之一。抗烯效呼农约的多Jiff克隆抗体的酶联免疫分析技术(ELISA)也有报道［5］,但是检测灵敏度不高。吋间分辨免疫分析技术具有高灵敏性、高选择性、快速等优点，可以弥补普通ELISA免疫分析技术灵敏度的不足。本研究制备了烯效呼半抗原和多克隆抗体，建立了烯效呼的TRFIA残留检测方法,为环境与食晶中

7、痕量烯效卩坐残留高灵敏检测提供技术支持。1资料与方法1.1一般资料1・2包被原的合成1.3固相包被板的制备1・5添加样品的处理河水经过滤，添加0.05〜0.5mg/L的烯效卩坐标样，用甲醇的PBS稀释，进行测定。称取10g土壤，添加0.05~0.5mg/kg的烯效呼标样，混匀，放置过夜，加入40ml二氯甲烷，超声lOmin,4000r/min离心lOmin,取上清液20ml于圆底烧瓶中减压浓缩，用含甲醇的PBS定容到10mlo每个处理设3个重复，各设一个空白对照，用建立的TRFIA法对样品进行分析。1・6测定2结果与分析2

8、.1包被原的鉴定对半抗原、载体蛋口及偶联物进行全波长扫描见图1,偶联物的紫外吸收光谱发生了明显的变化，具有载体蛋口和半抗原的紫外吸收特征。根据它们在280nm波长下的摩尔吸光系数估算得到包被原的结合比为7：1。图1半抗原、卵清蛋白及偶联物的紫外吸收光谱图2烯效卩坐TRFIA标准曲线1.4抗体的特异性用T