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1、烯效瞠时间分辨免疫研究方法探究摘要：基于多克隆抗体建立了烯效啖的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)关键词：烯效哇；多克隆抗体；时间分辨免疫分析Time-resolvedFluoroimmunoassayfortheDetectionoftheUniconazoleHONGXial,2*,XINGHai-long2,WANGChenchen2(1.SchooloftheEnvironmentandSafetyEngineering,JiangsuUniversity,Zhenjiang212013,
2、Jiangsu,China；2.JiangsuwisescienceandtechnologydevelopmentCo.LTD,Zhenjiang212009,Jiangsu,China)Abstract:Asensitivetime-resolvedfluoroimmunoassay(TRFIA)basedonpolyclonalantibodyfordetectionofuniconazolewasdeveloped.Ahaptenwassynthesizedandconjugatedwit
3、hovalbumin(OVA)asthecoatingantigen.Thecoatingantigenwascoatedbyphysicaladsorptionontoa96wellmicrotitreplate,whichwasthencompetedwithuniconazoleinthesampleforlimitedquantityofanti-uniconazoleantibodylabeledbyEu3+・Uniconazoleinthesamplescouldbedetermine
4、dbydirectcompetitionmethod・Atspikeddifferentlevels(0.05〜0.5mg/kginwaterandsoil)recoveriesofuniconazolewerefrom80.4%〜116.8%，withCVof2.6%〜8.7%.TheTRFIAcouldbeaconvenienttoolformonitoringuniconazoleresiduesinenvironmentandfoodsamples.Keywords：uniconazole
5、；polyclonalantibody；TRFIA烯效哇，属三吐类化合物，是80年代日本住友化学公司推出的高活性的植物生长延缓剂和杀菌剂。烯效呢延缓作物生长的作用机制在于它能有效的抑制植物体内赤霉素(GA)的生物合成，减少体内乙烯含量，增加细胞分裂素(CTK)含量，提高体内CTK/IAA的比例，从而使这些内源激素调控的生理效应发生相应的变化［1］。烯效吐常用于大田作物、果树、蔬菜、烟草、花卉等众多植物，活性高于多效哩，同时毒性较低，被广泛用于农业、园艺植物生产中［2］。随着人们对环境与食品安全关注
6、程度逐渐加大，迫切需要建立快速灵敏的检测烯效11坐残留的分析方法。烯效哇残留测定方法主要是高效液相色谱(HPLC)［3］和气相色谱(GC)［4］,这些方法前处理比较繁琐，检测结果受样品净化、浓缩等步骤的影响，不适合进行批量样品的快速检测，而免疫学技术在农药残留分析和环境监测中的应用越来越深入，已成为农药残留分析的重要方法之一。抗烯效哇农药的多克隆抗体的酶联免疫分析技术(ELISA)也有报道［5］,但是检测灵敏度不高。时间分辨免疫分析技术具有高灵敏性、高选择性、快速等优点，可以弥补普通ELISA免疫
7、分析技术灵敏度的不足。本研究制备了烯效呢半抗原和多克隆抗体，建立了烯效哩的TRFIA残留检测方法，为环境与食品中痕量烯效哇残留高灵敏检测提供技术支持。1资料与方法1.1一般资料1.2包被原的合成1.3固相包被板的制备1.5添加样品的处理河水经过滤，添加0.05〜0.5mg/L的烯效哇标样，用甲醇的PBS稀释，进行测定。称取10g±壤，添加0.05〜0.5mg/kg的烯效哇标样，混匀，放置过夜,加入40ml二氯甲烷，超声lOmin,4000r/min离心lOmin,取上清液20ml于圆底烧瓶中减压浓
8、缩，用含甲醇的PBS定容到10mlo每个处理设3个重复，各设一个空白对照，用建立的TRFIA法对样品进行分析。1.6测定2结果与分析2.1包被原的鉴定对半抗原、载体蛋白及偶联物进行全波长扫描见图1,偶联物的紫外吸收光谱发生了明显的变化,具有载体蛋白和半抗原的紫外吸收特征。根据它们在280nm波长下的摩尔吸光系数估算得到包被原的结合比为7：1。图1半抗原、卵清蛋白及偶联物的紫外吸收光谱图2烯效11坐TRFIA标准曲线1.4抗体的特异性用TRFIA在相同的条件下测定与烯效吐结构相似化合
