大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位的原核表达及其初步应用

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3、我絲述２。＂年５＃鮮餐声域今＇入占淳：．＇－＂＾＞戶．汾八一＊．’遍７兴公Ｖ式主苗苗巧？＞＾六六：：乂／－篇：，．少一Ａ紀产一Ｖ何月大肠杆菌不耐热肠毒素Ｂ亚单位的原核表达及其初步应用１大肠杆菌不耐热肠毒素Ｂ亚单位的原核表达及其初步应用摘要＇’＊－；／化加（：＆拍０）＆］１６３１：１３邮６６１１１６］〇１：０父１１１巧大肠杆菌不耐热肠毒素（￡１，）是分泌到细胞周质的一种热不稳定肠毒素，它由Ａ、Ｂ两个亚单位组成，能导致旅行者和猪等家畜的严重腹湾，目前还没有预防此疾病的有效疫苗。Ｌ

4、Ｔ不仅具有很强的黏膜免疫原性，还拥有较强的黏膜免疫佐剂效应。由于ＬＴＡ的毒副作用限制了其应用，我们将无毒性的Ｂ亚单位作为研究对象。我们试图通过制备ＬＴＢ重组蛋白，并，研究其作为疫苗预防幼畜腹泻的可能性将其与减毒沙口氏菌疫苗共同免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，Ｗ研究其黏膜免疫佐剂效应。研究目的：研究ＬＴＢ作为疫苗预防幼畜腹泻的可能性；研究ＬＴＢ作为黏膜免疫佐剂对减毒沙口氏菌疫苗的佐剂效应■。研究方法：查阅ＧｅｎＢａｎｋ中公布的ＬＴＢ基因序列，利用软件设计引物，ＰＣＲ扩増ＬＴＢ－ａｗ胡和巧／細ｎ双酶切后，目的基因，载

5、体质粒ｐＣｏｌｄＴＦ和ＰＣＲ产物经及将回收的载体和ＬＴＢ片段用Ｔ４连接酶连接Ｃｏ－ＴＦＬＴＢ，构建ｐｌｄ／重组质粒，对重组质粒进行鉴定。将Ｃｏ－ｐｌｄＴＦ／ＬＴＢ重组质粒转化入大肠杆菌ＢＬ２１，接着用ＩＰＴＧ进行低温过夜诱导表达，取－－ＰＡＧＥ）验证后再通过Ｈ上清通过十二烧基硫酸钢聚丙帰酌胺凝胶电泳（ＳＤＳｉｓ标签亲和纯化，获得可溶性蛋白ＴＦ／ＬＴＢ，用ＥＬＩＳＡ对纯化后的ＴＦ／ＬＴＢ蛋白进行鉴定。纯化的ＴＦ／ＬＴＢ蛋白用来免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，Ｈ免后用间接ＥＬＩＳＡ法对血清和粪便的ＩｇＧ和ＩｇＡ水平进行检测

6、，并用肠毒素大肠杆苗ＥＴＥＣＫ８８对免疫后的小鼠进行免疫保护实验，用来研究ＬＴＢ作为疫苗预防幼畜腹泻的可能性。沙口氏菌减毒疫苗与纯化的ＴＦ／ＬＴＢ蛋白Ｈ免后同样用间接ＥＬＩＳＡ法检测粪便中的ＩｇＡ水平，用来研究ＬＴＢ的黏膜免疫佐剂效应。ＰＣＲ成ｏ－ＴＦＢ研究结果；通过ｌｄ／ＬＴ重组质粒功扩増ＬＴＢ基因；成功构建ｐＣ；获得ＴＦＬＴＢＴＦＴＢ一ＦＬＴＢ／重组蛋白；／Ｌ作为疫苗预防幼畜腹泻有定效果；Ｔ／对沙口氏菌减毒疫苗具有黏膜免疫佐剂效应。：重组ＴＦ／ＬＴＢ为预防幼畜腹泻疫苗的研究提供了有利工具研究结论；ＴＦ／Ｌ

7、ＴＢ能够作为减毒沙口氏菌疫苗的黏膜免疫佐剂。关键词：大肠杆菌不耐热肠毒素；重组蛋白ＴＦ／ＬＴＢ；表达纯化；疫苗；黏膜佐剂扬州大学硕＋论文２．Ｐｒｉｍａｒｌｉ－ｙａｃａｔｉｏｎａｎｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆ足化次６／７ｃＡ／ａＣＯ＂ｈｅａｔｌａｂｉｌｅｐｐｐｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎＢｓｕｂｕｎｉｔｒｏｔｅｉｎｆｒｏｍａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｓｔｒａｉｎｐＡＢＳＴＲＡＣＴＨｅａ－ｔｌａｂｄｅｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉ打（ＬＴｉｓ泣ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎｔｈａｔｃａｎｓｅｃｒｅ

8、ｔｅ１：０ｔｈｅｅｒｉｌａｓｍｉｎ扮ｃＡｅＷｃＡ／幻）ｐｐ化．ＬＴｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆＡａｎｄＢｓｕｂｕｎｉｔｓａｎｄｉｔｃａｎｃａｕｓｅｓｅｖｅｒｅｄｉａｒｒｈｅａｏｆｔｈｅｔｒａｖｅｌｌ