微孢子虫感染诱导的家蚕应答反应及对其免疫信号通路的激活

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1、学校代码：10289分类号：Q93密级：公开学号：122310004江苏科技大学硕士学位论文微孢子虫感染诱导的家蚕应答反应及对其免疫信号通路的激活研究生姓名乐亚杰导师姓名沈中元申请学位类别理学硕士学位授予单位江苏科技大学学科专业微生物学论文提交日期2015年06月01日研究方向分子微生物学论文答辩日期2015年06月03日答辩委员会主席沈兴家评阅人2015年06月05日分类号：Q93密级：公开学号：122310004理学硕士学位论文微孢子虫感染诱导的家蚕应答反应及对其免疫信号通路的激活学生姓名乐亚杰指导教师沈中元研究员江苏科技大学二O一五年六月AThesisSubmittedinFulfil

2、lmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceResponsesofsilkwormtomicrosporidiuminfectionandtheactivationofimmunesignalingpathwaySubmittedbyYajieYueSupervisedbyProf.ZhongyuanShenJiangsuUniversityofScienceandTechnologyJune,20154江苏科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用

3、的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：2015年06月05日江苏科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。(2)不保密。学位论文作

4、者签名：指导教师签名：年月日年月日摘要摘要宿主-病原体之间的相互作用非常复杂，近年来对宿主与病原体之间相互作用的研究已经成为热点。家蚕微孢子虫N.bombycis是一种主要的家蚕病原体，其引起的家蚕微粒子病会给蚕业生产带来重大损失。对家蚕对微孢子虫侵染的应答反应和两者之间相互作用的深入了解，有助于微粒子病的防治和治疗。在昆虫中，中肠是消化和摄食营养的重要器官，同时也作为抵抗病原体入侵的第一道防线，因此，中肠是研究微孢子虫及其宿主-家蚕相互作用的理想模型。本研究建立了微孢子虫感染的家蚕BmN细胞体系，对微孢子虫在细胞内的增殖进行了观察研究，利用illumina基因组测序分析平台对摄食感染微孢子

5、虫后6、12、18、24、48、72和96h的家蚕中肠表达谱数据进行分析。同时，利用荧光定量PCR技术测定了微孢子虫感染后，家蚕免疫系统中参与信号识别和信号转导的相关蛋白的基因转录水平。1.家蚕微孢子虫体外感染增殖体系的建立。通过碱处理法诱导家蚕微孢子虫发芽，并利用家蚕BmN细胞系进行接种培养。观察其增殖发现，微孢子虫在宿主细胞中的发育是一个逐渐变化的过程。随着微孢子虫的不断增殖，占领宿主细胞质空间并裂解宿主细胞，释放出来的微孢子虫对周围细胞进行侵染，最终占领整个培养空间。该体系的建立为家蚕微孢子虫基因组学、蛋白质组学的研究打下了基础。2.微孢子虫感染引起的家蚕应答反应。通过对微孢子虫感染后

6、的家蚕中肠进行的数字基因表达谱研究，共得到1902个差异表达基因，包括1168个上调表达的基因和734个下调表达的基因。而且在微孢子虫感染的不同时期，差异表达基因的个数处于动态变化之中，并且与微孢子虫在宿主体内的的增殖呈一定的相关性；对不同时间段的差异基因进行聚类分析结果表明，在5个时间点都发生差异表达的基因只有3个；在6h、24h、48h和96h4个时间点都差异表达的基因有7个，在这些基因中，多数都与家蚕的生理代谢相关并呈现下调表达；对差异基因进行的GO富集分析结果显示：微孢子虫感染的不同时期，不同功能的蛋白表达差异较大，早期主要为参与家蚕正常代谢和蛋白功能相关的蛋白，后期则为细胞组成相关

7、蛋白基因的差异表达；KEGG富集分析鉴定出出Lysinedegradation、SNAREinteractionsinvesiculartransport、Folatebiosynthesis等24条显著差异的代谢途径，表明微孢子虫侵染对家蚕叶酸合成、剪接体、烟酸和烟酰酸代谢、自噬等代谢途径有很大影响。此外，数字基因表达谱还鉴定出一些参与家蚕先天性免疫的一些基因。3.微孢子虫感染对家蚕免疫信号通路的激活。通过