neca诱导抗心肌缺血再灌注损伤保护作用的线粒体机制研究

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1、分类号：R363学校代码：10062密级：学号：2012602060硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：NECA诱导抗心肌缺血/再灌注损伤保护作用的线粒体机制研究TITLEThemitochondrialmechanismunderlyingNECA’scardioprotectionagainstischemia/reperfusioninjury一级学科：基础医学二级学科：病理学与病理生理学论文作者：赵萌指导教师：徐哲龙教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R363学校

2、代码：10062密级：学号：2012602060学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：NECA诱导抗心肌/缺血再灌注损伤保护作用的线粒体机制研究TITLEThemitochondrialmechanismunderlyingNECA’scardioprotectionagainstischemia/reperfusioninjury一级学科：基础医学二级学科：病理学与病理生理学论文作者：赵萌指导教师：徐哲龙教授天津医科大学研究生院二〇一五年

3、五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅

4、和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的，探讨非选择性腺苷受体激动剂5’-N-乙基酰胺基腺苷(5-(N-ethylcarboxamid-o)adenosine，NECA)对缺血/再灌注（Ischemia/reperfusion，I/R）损伤心肌细胞的保护作用及其相关线粒体机制研究。方法利用H9c2心肌细胞系建立模拟I/

5、R损伤模型，采用CCK-8细胞活性测定试剂盒检测细胞活性；通过线粒体膜电位检测试剂盒（MitochondrialmembranepotentialassaykitwithJC-1）检测细胞线粒体膜电位(Mitochondrialmembranepotential，△Ψm)；使用Amplexred过氧化氢/过氧化物酶试剂盒（Amplexredhydrogenperoxide/peroxidaseassaykit）测定细胞内H2O2水平，活性氧检测试剂盒（Reactiveoxygenspeciesassayki

6、twithDCFH-DA）检测细胞内活性氧（Reactiveoxygenspecies，ROS）水平，Mitosoxred线粒体超氧化物指示剂（Mitosoxredmitochondrialsuperoxideindicator）检测线粒体内ROS水平；利用复合体I酶活性检测试剂盒（ComplexIenzymeactivityassaykit）检测线粒体呼吸链复合体I的活性。结果1.不同浓度NECA（0.1、1、10µmol/L）对I/R后心肌细胞活性具有不同程度的保护作用(均P<0.05)，其中以1µmo

7、l/L时保护作用最为明显，因此我们使用该浓度进行后续实验；2.I/R后细胞活性明显降低，NECA可抑制I/R后细胞活性的下降，而腺苷A2A受体拮抗剂SCH58261、腺苷A2B受体拮抗剂MRS1706单独或联合使用均可阻断NECA对细胞的保护作用(均P<0.05)，提示NECA通过激活腺苷A2A和A2B受体发挥其抗I/R损伤心肌保护作用；3.I/R后细胞JC-1红绿荧光强度比值明显降低，说明I/R导致△Ψm的显著降低，提示I/R导致线粒体通透性转换孔(Mitochondrialpermeablitytran

8、sitionpore，mPTP)的开放。NECA可抑制I/R后细胞△Ψm的改变，而腺苷A2A和A2B受体拮抗剂单独或联合使用均可抑制NECA对△Ψm的保护作用(均P<0.05)，提示NECA通过激活腺苷A2A和A2B受体而发挥其抗I/R损伤心肌保护作用，其机制可能与抑制I/R损伤引起的mPTP的开放有关；I天津医科大学硕士学位论文4.I/R损伤后细胞Amplexred、DCF、Mitosoxred荧光强度均显著增