klf8在调控人骨肉瘤细胞增殖和细胞侵袭中的作用

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1、系、•考SOOCHOWUNIVERSITY博士专业学位论文论文题目KLF8在调控人骨肉瘤细胞增殖和______________细胞侵袭中的作用研究生姓名林峰指导教师姓名________________姚阳_________专业名称________________肿瘤学_________研究方向____________骨肉瘤转移机制论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研宄成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过

2、的材料。对本文的研宄作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：^^期：一之多苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研宄所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被査阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本

3、学位论文属在____年_月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：导师签名：日期KLF8在调控人骨肉瘤细胞增殖和细胞侵袭中的作用中文摘要KLF8在调控人骨肉瘤细胞增殖和细胞侵袭中的作用中文摘要骨肉瘤(osteosarcoma，os)是最常见的原发性恶性骨肿瘤，多发生于儿童和青少年发育时期。通过手术治疗后，发生转移的骨肉瘤病人的术后五年存活率普遍低于20%。骨肉瘤如果不及时治疗，往往会在6至12个月内通过血行转移的方式发生肺转移现象，这已经成为骨肉瘤临床观察中，最为显著的特征之一，也是影响病人预后的主要因素。KLF8(Krüppel-likefactor8)是KLF转录因子家族第一亚群的一

4、员。KLF家族在N末端均具有三个高度保守的锌指蛋白结构，可以特异结合富含GC的启动子区。KLF转录因子在人类生长发育以及各种疾病包括肿瘤发生发展中发挥着重要的调控作用。KLF8被发现在多种肿瘤细胞中高表达。KLF8是调控细胞周期的重要转录因子，其在致癌性转化(oncogenictransformation)和上皮-间质转化(epithelialtomesenchymaltransition,EMT)中具有关键作用。虽然关于KLF8在肿瘤中的功能已有不少的研究，但KLF8在人骨肉瘤中的功能还未见详尽报道。本研究的目的就是探讨KLF8在Saos-2骨肉瘤细胞中尤其是细胞侵袭中的生物学作用。首先通

5、过RT-PCR(real-timePCR)和westernblotting实验，发现KLF8在骨肉瘤细胞系中的表达远远高于正常成骨细胞中的表达，且恶性越高、侵袭性越强的细胞，KLF8的表达量越高。同时对骨肉瘤病理组织的检测发现，骨肉瘤原发灶KLF8表达高于癌旁组织,但低于肺转移灶。通过构建沉默KLF8基因表达的shRNA慢病毒载体转染入Saos-2细胞，以随机合成的shRNA作为阴性对照，QRT-PCR及WB检测发现在高恶性骨肉瘤细胞系Saos-2细胞中成功沉默了KLF8基因的表达，显著下调了KLF8的mRNA和蛋白水平。构建稳定表达KLF8-shRNA的Saos-2细胞，分析了KLF8基因

6、的沉默对骨肉瘤细胞系生长增殖的影响。首先用MTT方法测定细胞增殖情况。同阴性对照细胞相比，shRNA-KLF8组的细胞数明显少于阴性对照细胞，说明KLF8的沉默抑制了细胞的增殖。平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验发现KLF8表达降低的细胞形成克隆数明显少于对照细胞，说明KLF8影响了细胞的群体依赖性和克隆形成能力。流式细胞术对细胞周期和细胞凋亡进行分析发现KLF8的沉默使骨肉瘤细胞在G0/G1期停滞，且细胞凋亡率显著提高。说明KLF8对细胞增殖的影响是通过使细胞周期停滞和增加细胞凋亡两方面来完成的。@通过Transwell细胞侵袭实验检测KLF8沉默后细胞侵袭能力的变化，实验发现KLF8的

7、沉默降低了细胞分解细胞基质并侵袭到下层小室的能力。跟阴性对照比，迁移到下层小室的细胞明显少于对照细胞，说明KLF8的RNA干扰影响了骨肉瘤细胞的侵袭能力。I中文摘要KLF8在调控人骨肉瘤细胞增殖和细胞侵袭中的作用本研究显示KLF8在骨肉瘤的发生以及细胞的侵袭性中具有重要的调控作用，并为KLF8在骨肉瘤治疗中作为可能的药物治疗靶点提供了理论依据。关键词：骨肉瘤，KLF转录因子，KLF8，细胞侵袭IIKLF8在调