一个遗传性牙本质发育不良ⅰ型家系的致病基因研究

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1、分类号密级ＵＤＣ编号？似！似淨硕去学位论文—个遗传性牙本质发育不良Ｉ型家系的致病基因硏究Ｒｅｓｅａｒｃｈ－ｏｎｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｃａｕｓｉｎｇｅｎｅｉｎａｈｅｒｅｄｉｔａｒｅｎｔｉｎｇｙｄｄｙｓｐｌａｓｉａｔｙｐｅＩｆａｍｉｌｙ阳奇导师姓名徐湘民教授专业名称遗传学培养类型学术型论文提交日期２０１５年４月１６日南方医科大学２０１２级硕壬学位论文一个遠传性牙本质发育不良Ｉ型家系的致病基因研究Ｒｅｓｅａｒｃｈ－ｏｎｔｈｅｄｉｓ

2、ｅａｓｅｃａｕｓｉｎｅｎｅｉｎａｇｇｈｅｒｅｄｉｔａｒｙｄｅｎ材ｎｄｙｓｐｌａｓｉａｔｙｐｅＩｆａｍｉｌｙ３１３７１２７９课题来源：国家自然科学基金（编号：）２０１２０１０００９５５１广东省自然科学基金（编号：Ｓ）学位申请人阳奇导师姓名徐湘民教授专业名称适传学培养类型学术型培养层次硕±研究生＾巧在学院基础医学院＞答辩委员会主席张学教授＿答辩委员会委员曾令文研究员￣王室教授赵存友教授韦相才教授２０１５年４月１６日广州硕壬学位论文■－个

3、逸传性牙本质发育不良Ｉ型家系的致病基因研究硕±研究生：阳奇导师：徐湘民教授指导老师：熊符教授猜要背景与目的遗传性牙本质疾病ｅｄ一（ＨｅｒｉｔａｒＤｅｎｔｉｎＤｅｆｅｃｔｓ）是ｙ种常见的人类牙本质遗一传性疾病，主要局限于牙乳头跟牙齿中胚层发育异常的类疾病，其发病率为Ｗ－。ｌ／１００００ｙ６００〇早在巧７３年，Ｓｈｉｅｌｄｓ将牙本质发育不全分为两大类：遗传性牙本质发育不良（ＤｅｎｔｉｎＤｓｌａｓｉａＤＤ）与牙本质发育不全（Ｄｅｎｔｉｎｏｅｎｅｓｉｓｙｐ，ｇＩｍｐｅｒｆｅｃｔ，ＤＧＩ）；５小类（

4、２类牙本质发育不良与３类牙本质发育不全）。本实验－主要研究牙本质发育不良Ｉ型（ＤＤＩ）。一ＤＤ－Ｉ（ＯＭＩＭ：１２５４００）是种罕见的染色体显性遗传疾病，外显率不足Ｐｌ１００％，发病率为ｌ／１００００〇。临床检查显示为牙冠形态、色泽表现正常，牙本质形成缺陷和髓腔闲塞，经常伴有根尖Ｘ线透新。Ｂａｌｌｓｃｈｍｉｅｄｅ在１９２０年对这种疾病进行了相应的描述一，他将来自于同个家庭的７个小孩牙齿牙根短纯、＂＂Ｗ牙齿自然脱落现象称之为条件性无牙根性牙齿。斑马鱼的牙齿和人类及其它哺郭动物在结构上类似，拥有牙髓腔、牙本质和

5、类牙釉质。在牙齿附着期间存在釉器，发育期和人类牙齿发育期相似，有蕾状期、帽状期、钟状期，但斑马鱼牙齿发育周期短、过程简单。在基因调控Ｉ搞要方面，斑马鱼中调控牙齿发育的基因大部分在人类中都有相应的同源基因，如公ＭＡ、巧并＼如ｉＷ、巧化２口、。托、戶０ｘ９等多个基因。另，能谱分析、扫描电镜比较成年斑马鱼牙齿与人类１６周龄胎儿牙胚的矿化程度和Ｃａ、Ｐ比例，发现两者相似度极高。在组织和超微结构上，斑马鱼的牙齿也和人类牙齿相似性很高。因此，选择斑马鱼作为牙齿发育研究的模式生物。一－目前对于ＤＤＩ型的相关致病基因的

6、研究仍然是个迷，为解决这难题，本一课题组对个河南郑州的中国人家系进行了相关基础研究。利用连锁分析、全－ａｎｅｒ－基因组测序和ｓｇ测序等方法证实阿基因突变导致ＤＤＩ型疾病，为ＤＤＩ型疾病诊断提供分子学依据。通过对巧基因的分析，阐述了Ｗ很基因突－ｉ变的致病机理。在细胞水平，利用过表达与ｓＲＡＮ敲降实验对牙齿发育相关经典通路经典通路中的相关基因的调控作用进行分析，为后阐明一牙齿发育机理提供重要的信息。利用斑马鱼这模式生物，Ｗ斑马鱼的牙齿发＂＂＂＂＂＂ｒｅｓｃｕｅ育系统作为模型，采用敲低表法和过量表达的方法结合实验，

7、初步研究了姑基因在斑马鱼牙齿发育过程中的功能作用。材解施一－１．对个中国河南巧州的中国人ＤＤＩ家系采用连锁分析，全基因组外显子测序、ｓａｎｇｅｒ测序Ｗ及限制性内切酶酶切验证等技术方法，确定致病基因与突变位点。家系样本ＤＮＡ采用酪／氯仿方法提取，ＲＮＡ使用ＴＲＩＺ０Ｌ与试剂盒提取（ＲＮｅａｓｙＭｉｎｉＫｉｔ．Ｑｉａｇｅｎ），然后用去ｇＤＮＡ逆转录试剂盒转录为ｃＤＮＡ。２．使用高分辨率烙炼曲线（ＨｉｇｈＲｅｓｏｌｕｔｉｏｎＭｅｌｔｉｎｇ，ＨＲＭ）技术筛查当地人群３００份随机样本，确定阿Ｗ公基因ＩＶＳ７＋４

8、６０Ｇ的突变频率。３－．ＷＷ５基因的时空表达谱：利用ＲＴＰＣ民确定ＫＰＷ公基因在人不同组织、细胞系及不同时期的小鼠脑组织表达谱。组织与细胞系总ＲＮＡ使用