羊膜载体对子宫内膜细胞hgf、mmp-9、vegf表达的影响

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1、学校代码10459学号或申请号201212463714密级公开硕士学位论文羊膜载体对子宫内膜细胞HGF、MMP-9、VEGF表达的影响作者姓名：李玛俊导师姓名：任琛琛教授学科门类：医学专业名称：妇产科学培养院系：第三临床学院完成时间：2015年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheeffectsofHGF,MMP-9,VEGFexpressionforendometrialcellsgrowingonamnioticmembranecarrierByMajunLiSupervisor:Prof.Ch

2、enchenRenGynecologyandObstetricsThirdAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay2015原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。木声明的法律责任由本人承担。学位论文作者円期年夂月”円学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同

3、意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者H期:年土月$日摘要羊膜载体对子宫内膜细胞HGF、MMP-9、VEGF表达的影响研究生：李玛俊导师：任琛琛专业：妇产科学郑州大学第三临床学院河南郑州450052摘要近年来随着人流、药流手术及宫腔操作的增多，导致子宫内膜基底部全部或部分缺损、变

4、薄，使子宫前后壁粘连、宫腔闭锁,宫腔容积减小，引起患者月经改变和生育异常。因此，宫腔粘连已成为妇科常见病之一，并且成为不孕、流产、早产的一项重要原因。现阶段宫腔粘连尤其是重度粘连患者治愈率低下，手术分离后粘连易复发，严重影响着广大女性的身体及心理健康。因此宫腔粘连分离术后如何防止粘连复发、促进子宫内膜生长的治疗是临床工作的一大难题。目前，宫腔镜下宫腔粘连切除术（TCRA）是宫腔粘连治疗的标准术式，术后放置宫内节育器、宫腔放置球囊、应用生物胶及防粘连膜并配合人工周期药物治疗等方法对预防其再粘连有一定的临床疗效。然而中、重度宫腔粘连患者，宫腔内创面较大，正常内膜组织较少，更易再度形成粘连

5、，以上方法对此类患者疗效欠佳。有学者利用羊膜移植治疗重度宫腔粘连，发现其能够促进子宫内膜再生从而降低宫腔再粘连的发生率。羊膜具有抗原性低、促进上皮化、减轻炎症反应、抑制纤维组织增生等作I摘要用，羊膜移植在眼表重建及皮肤移植中均有所应用，并取得了令人满意的效果。做为一种特殊的低免疫原性的物质，其拥有特殊的结构及分泌功能，新鲜羊膜中含大量生物活性物质，可以促进上皮细胞增殖分化，减少瘢痕形成及预防粘连等。目前羊膜已在各学科及手术领域广为发展。近年来，羊膜的临床应用范围逐渐扩大，包括眼科、烧伤科、骨组织重建、泌尿系统等等，而在妇科，羊膜可以作为一种生物敷料应用于阴道重建、宫颈形成，也有实验证

6、实新鲜羊膜移植入IUA分离术后的宫腔，可以较好的降低宫腔再粘连的发生率，有很好的应用前景。目的本课题通过在新鲜羊膜基质面培养子宫内膜细胞，观察细胞在羊膜基质面的生长情况，并采用Realtime-PCR及ELISA两种实验方法比较以羊膜为载体培养的子宫内膜细胞与体外正常培养液培养的子宫内膜细胞的肝细胞生长因子（HGF）、基质金属蛋白酶（MMP-9）及血管内皮因子（VEGF）的表达水平，初步探索以人羊膜作为载体种植人子宫内膜细胞的可行性，为探索子宫内膜重建提供有效和来源丰富的移植材料，并为探讨羊膜移植预防宫腔粘连分子机制积累实验数据。方法1.采用胶原酶消化及筛网过滤等方法体外分离培养人子

7、宫内膜基质细胞，通过形态学观察及免疫组化法对培养的细胞进行鉴定；采用胰酶消化、机械刮除等方法制备去除羊膜上皮细胞的羊膜外基质支架。2.将体外扩增传代的子宫内膜细胞种植在去除羊膜上皮细胞的羊膜外基质支架上作为实验组，以无羊膜载体培养的子宫内膜细胞为空白对照组。倒置显微镜下观察两组细胞生长形态的变化，实时荧光定量PCR法测定各组细胞HGF、MMP-9、VEGFmRNA的表达水平，ELISA法测定各组细胞MMP-9蛋白表达量的变化。II摘要3.将实验所得数据以均