mirna-214在胃癌腹膜转移中的作用及机制研究

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1、分类号：R5单位代码：10752密级：公开学号：201200194宁夏医科大学硕士研究生学位论文miRNA-214在胃癌腹膜转移中的作用及机制研究TheStudyonFunctionsandMechanismsofmiRNA-214inthePeritonealDisseminationofGastricCancer学位申请人：辛瑞娟指导教师：白飞虎教授申请学位门类级别：医学专业名称：内科学研究方向：胃癌腹膜转移所在学院：临床医学院论文完成日期：二○一五年三月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplic

2、ationofMaster’sDegreeTheStudyonFunctionsandMechanismsofmiRNA-214inthePeritonealDisseminationofGastricCancerStudent’sName:RuijuanXinSupervisor：FeihuBaiSubjectCategory:MedicineMajor:InternalMedicineSpecialty:PeritonealMetastasisofGastricCancerCollege:ClinicalCollegeCompletionDate:Ma

3、rch.2015宁夏医科大学硕士学位论文中文摘要miRNA-214在胃癌腹膜转移中的作用及机制研究摘要背景胃癌是恶性肿瘤死亡最主要的原因之一。胃癌术后腹膜转移的发生率在15%-50%甚至更高，成为胃癌死亡最主要的原因。胃癌发生腹膜转移预后很差，平均生存时间在1-1.6月到3.1-9月。对于胃癌腹膜转移的患者，虽然有很多种不同的治疗方法，如腹腔内化疗、腹腔内温热化疗、免疫疗法、高强度聚焦超声等，但是治疗效果却并不理想。因此，阐明胃癌腹膜转移的机制，寻找抑制胃癌腹膜转移的新途径，不仅能更好地改进治疗措施，更能提高患者的生存率。随着1993年第一个microRN

4、As(miRNAs)的发现，人们对其功能的研究也越来越深入。MiRNAs被证实与多种疾病有关，例如糖尿病、高血压病、艾滋病，及各种肿瘤。大量的研究表明miRNAs在胃癌的发生、发展、诊断、治疗及预后评估中起到非常重要的作用。在肿瘤中常以抑癌基因或癌基因的身份存在的，起到调节复杂的生物学功能的作用，它能够影响细胞的侵袭、转移增殖、凋亡及分化。MiRNAs作为一种新的基因，它是通过与靶基因mRNA3’非翻码区(UTRs)完全或部分碱基配对，导致mRNA的降解或抑制mRNA的翻译。虽然目前已经有大量研究表明microRNA与胃癌之间存在相关性，但是microRN

5、A在胃癌腹膜转移中的作用及其潜在的作用机制方面的研究较少。在本课题中，我们参考了国内外相关文献报道及前期microRNA高通量芯片分析的研究，初步检测到microRNA-214-3p（miRNA-214、miR-214）在胃癌腹膜高转移细胞系GC9811-P与胃癌细胞系GC9811中存在着差异性表达，并预测其发挥着特殊的生物学功能。本课题将对miRNA-214在胃癌腹膜高转移细胞系的表达水平、生物学功能及可能的作用机制进行初步的研究和探讨。目的I宁夏医科大学硕士学位论文中文摘要1.检测miRNA-214在胃癌细胞系中的表达水平。2.研究miRNA-214在

6、胃癌细胞系中的生物学功能。3.探讨miRNA-214在胃癌细胞系中发挥功能的机制。方法1.在相同的条件下复苏并培养细胞GC9811和GC9811-P，待细胞传至2-3代后取对数生长期的细胞提取小RNA,并检测小RNA的OD值在1.8-2.0之间；qRT-PCR的方法验证目的基因miR-214在细胞GC9811和GC9811-P中的表ΔΔCt达差异情况，并用2-法计算相对值，选U6作为内参对照。2.订购miRNA-214慢病毒，将空载体病毒和miRNA-214上调病毒感染人胃癌细胞GC9811，分别标记为GC9811+LV-NC和GC9811+LV-miR-

7、214；将空载体病毒和miRNA-214下调病毒感染人胃癌细胞GC9811-P，分别标记为GC9811-P+LV-NC和GC9811-P+LV-miR-214IH，并使用qRT-PCR的方法验证转染效果。3.运用稳转细胞系进行transwell迁移、侵袭实验，MTT增殖实验、平板克隆实验、细胞凋亡实验等，研究miR-214异常表达后对胃癌细胞系GC9811/胃癌腹膜高转移细胞系GC9811-P生物学功能的影响。4.用生物信息学分析软件TargetScan、MiRanda预测miR-214可能的靶基因，选择与细胞侵袭、迁移能力相关的基因，通过qRT-PCR、

8、Western-blot等方法，对其预测的靶基因编码蛋白进行初步的