生长抑制素基因工程亚单位疫苗对小鼠生长的影响

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1、学校代码：10264研究生学号：M120104121上海海洋大学硕士学位论文题目：生长抑制素基因工程亚单位疫苗对小鼠生长的影响EffectofSomatostatinGeneticEngineering英文题目：subunitVaccineonGrowthofMice研究方向：基因疫苗及免疫学姓名：陈磊专业：临床兽医指导教师：易建中研究员二O一五年四月三日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰

2、写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日生长抑制素基因工程亚单位疫苗对小

3、鼠生长的影响摘要构建带有生长抑制素的pET-32a-2SS28-SS14和pET-32a-3SS28原核表达质粒并检测其在大肠杆菌中的表达，并用所表达的目的蛋白制成生长抑制素亚单位疫苗，将该疫苗免疫小鼠，研究其对小鼠生长的影响，探讨生长抑制素亚单位疫苗免疫小鼠后对促进生长效果的性别差异性，并研究生长抑制素不同亚型串联后对促进小鼠生长的不同效果。为研究获得经济高效的生长抑制素亚单位疫苗，以提高经济动物的生产效率。1.pET-32a-2SS28-SS14和pET-32a-3SS28原核表达质粒的构建选用生长抑制素的两种亚型SS-14和SS-28，将其混合串联到pET-32a表

4、达系统中，得到pET-32a-2SS28-SS14和pET-32a-3SS28两种重组质粒。并通过PCR扩增和测序鉴定表明，目的基因在pET-32a质粒中的插入位点，序列以及方向完全正确。2.2SS28-SS14和3SS28目的蛋白的表达与纯化将pET-32a-2SS28-SS14和pET-32a-3SS28两种重组质粒转化到E.coliBL21De3中，通过IPTG诱导大肠杆菌介导表达出目的蛋白，并通过westernblot分析鉴定，所表达蛋白为目的蛋白。将菌体超声破碎后离心对目的蛋白进行可溶性分析以后，将上清进行蛋白纯I化，获得纯化的目的蛋白。3.生长抑制素亚单位疫苗

5、的制备以及动物免疫将诱导纯化的目的蛋白与佐剂混合乳化制成生长抑制素亚单位疫苗，免疫小鼠，选用4周龄离乳昆明鼠60只，雌雄各半。将雌雄各随机分3组，每组10只，对每只做好编号标记。按如下分组进行免疫：2SS28-SS14♀：免疫2SS28-SS14蛋白的雌鼠；2SS28-SS14♂：免疫2SS28-SS14蛋白的雄鼠；328AA♀：免疫3SS28蛋白的雌鼠；328AA♂：免疫3SS28蛋白的雄鼠；空白♀：注射生理盐水白油乳化溶液的雌鼠；空白♂：注射生理盐水白油乳化溶液的雄鼠。对4周龄的小鼠初始体重的测定记录，并对其进行首次免疫。实验组每只小鼠免疫100ug蛋白量的相应剂量疫

6、苗，对照组注射等剂量的生理盐水白油乳化溶液对照。1周后再进行一次加强免疫，实验组每只小鼠免疫50ug蛋白量的相应剂量疫苗，对照组注射等剂量的生理盐水白油乳化溶液对照。从4周龄开始到7周龄，每周对小鼠体重做一次称重记录。采用SPSS进行统计学分析。免疫两种疫苗的雌鼠的实验组与空白对照组平均增重相比，差异均不显著（P>0.05）。免疫3SS28疫苗的雄鼠实验组与空白对照组平均增重相比，免疫后第1、第2周体重增加不显著（p>0.05），第3周平均增重显著高于空白对照组（P<0.05）。免疫2SS28-SS14疫苗的雄鼠实验组与空白对照组平均增重相比，免疫后第1、第2周平均增重显

7、著高于空白对照组（p<0.05）,第3周差异极为显著（P<0.01）。说明生长抑制素不同亚型的亚单位疫苗对昆明鼠生长影响性别差异性较大；从雄鼠的增重效果来看，SS-14II亚型的免疫增重效果优于SS-28亚型，说明生长抑制素不同亚型的免疫原性有所差异，导致免疫效果的不同。综上所述，本研究通过基因克隆技术成功重组构建pET-32a-2SS28-SS14和pET-32a-3SS28原核表达质粒并检测其在大肠杆菌中表达。并将表达的目的蛋白纯化后制备成生长抑制素亚单位疫苗免疫小鼠，发现免疫3SS28疫苗的雄鼠实验组与空白对照组平均增重