bv口服型生长抑素基因疫苗对小鼠肠道局部免疫效果的研究

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1、中文摘要口服型生长抑素基因疫苗对小鼠肠道局部免疫效果的研究摘要口服型生长抑素(Somatostatin，55)基因疚苗是将pcD汉人3.1一HBs/55质粒导入减毒沙门氏菌(sL72o7)中构建而成。该疫苗进入体内能迅速裂解释放质粒，表达乙肝表面杭原/生长抑素(HBs/55)的融合蛋白，刺激机体产生5杭体以中和5，解除55对生长的抑制作用，促进动物生长。该及苗具有成本低廉、使用方便、安全性好等特点，有利于在实际生产中推广应用.本论文首先对疫苗的安全性以及细菌在体内的分布进行了检测，然后阐明了该疫苗对小鼠生长发育的影响，最后就该疚苗表达融合蛋白的情况和时肠道免疫功能的影响进行了详细研

2、究。口服型5基因疫苗的安全性测定如下:30只健康的4周龄雌性小鼠，随机分为试验组1、试验组1和对照组。试验组1灌胃给予疫苗菌液10，cFu/只(CFu:菌落形成单位)，试验组11给予菌液10，cFu/只，对照组给予200刃LPBs.观察15天，1周后剖解部分小鼠。结果显示，试验组1，卜鼠未见明显不良反应，剖解后内脏无明显病变。说明该疫苗在10勺FU/只的剂量下安全性较好.150只4周龄雌性小鼠，随机分为3个试验组。试验组1首次免疫后2、4周分别加强免疚一次，首次免疫剂量为灌胃菌液10忆FU/只(20刀L)，加强免疫剂量同首次免疫;试验组1为首次免疚后第2、3天分别加强免疚一次，免疫

3、剂量同试验组1;试验组In为对照组，口服PBS3次，每次200声L。减毒沙门氏菌在体内分布情况:首次免疫后8天内不同时间段各宰杀小鼠2只，采肠道和肝脾各组织进行触片，姬姆萨染色观察菌体在组织中的分布情况。结果显示，口腔灌服疫苗菌液24h内空肠中细菌数量明显增多，脾脏中在免疫后第4天发现细菌，肝脏在感染后始终未发现细菌。推测免疫后进入肠道中的细菌可能一部分被分解，一部分被肠道吞噬细胞摄取转运至次级淋巴器官后诱导局部秘膜免疫和全身免疫反应.口服型5基因疫苗对小鼠生长发育的影响:从首次免疫开始每周每组取10只小鼠称重，观察小鼠体重变化。结果显示，两个试验组小鼠免疫后体重有一定增加，其中试

4、验组且增重效果较好，但因观察时间太短，增重效果尚未达到显著水平。口服型55基因疫苗在体内表达融合蛋白的检测:首次免疚后于第3、5和7周每组扑杀小鼠8只，应用亲和免疫组化的方法(人Bc法)分别显示十二指肠和空肠中乙肝表面杭原(HBsAg)阳性细胞和生长抑素(55)阳性细胞的分布及数量变化.结果口服型生长抑素基因疫苗对小鼠肠道局部免疫效果的研究显示，首次免疫后第3周试验组1和试验组1，卜肠内出现HBsAg阳性细胞并维持到第7周;首次免疫后第5周和第7周两个试验组小肠内55阳性细胞数量比对照组极显著减少(浅0.01)。结果证明，口服型5基因疫苗免疚小鼠后小肠固有层及上皮中一些细胞可表达H

5、Bs人9/55融合蛋白，同时5阳性细胞数量也减少，推测该基因疫苗刺激机体表达蛋白后能产生5杭体。口服型55基因疫苗对小鼠肠道局部细胞免疫的影响:应用HE染色、亲和免疫组化〔人BC法)、甲苯胺蓝染色的方法分别显示小肠上皮内琳巴细胞(iIEL)、固有层CD魂守细胞和肥大细胞的分布及数量变化。结果表明，首次免疫后第3周试验组11工孔数量极显著增加(凡0川)，第5周两个试验组iIEL数量均有显著性增加(P<0，盯)，首次免疫后第7周试验组11工孔数量保持显著增加(尺0.05)趋势。首次免疫后小肠固有层C训T细胞面积增加，但与对照相比不显著.首次免疚后第3周空肠中肥大细胞数量与对照组相比有极

6、显著性增加(P<0砚)。本试验结果提示了该5基因疫苗能提高小鼠肠道局部细胞免疫功能。关键词:55基因疫苗;减毒沙门氏菌;5阳性细胞;HBsAg阳性细胞;小肠细胞免疫英文摘要STt心YONEFFECTSOF飞，HEORALSOMATOSTATINGENEVACCINEONIMMUNITyININTESTINE0FMICEABSTR气CTThoPl肪midpcDNA31、HBs/SSwastran殉rmedintoanatt。加ateds‘t冲himuri姗，trains幼207，resultinginorals0I”atostatin(S5)罗nevacine.Thobaderial

7、ysosquicklyafterimmunization，itcanex声essHBsAg/SsProtein，ProduceSSantibodywhich卿tra主ize伽1喇bitionofSS，sothoSSgeneva喊necanPromot己grow丈hThevac汤ehascharacteristicsof比eaP即st凡conv即ienoeandsafetywhichcanbewidelygener班ized.ThePurposoofthisstu勿wa