阴虚对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

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时间:2018-11-23

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1、阴虚对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响作者:郑里翔张玉仁朱卫丰刘红宁【摘要】  目的为阐明阴阳失衡对肿瘤生长的影响。方法采用甲状腺素和利血平、氢化可的松分别制作阴虚、阳虚模型,并接种S180瘤株;用RT-PCR的方法分析肿瘤细胞基因表达的水平。结果阴虚组的瘤重均高于正常和阳虚组,而差异不明显(P>0.05),但影响肿瘤增殖的PA基因表达水平明显高于正常和阳虚组(P<0.05)。结论阴虚体质可加速肿瘤的生长,其机理可能是增加肿瘤细胞中的PA基因的表达。【关键词】阴阳虚荷瘤小鼠瘤重基因表达  Abstract:ObjectiveToelucidatetheinfluenceof"Yin

2、"and"Yang"imbalanceontumoroccurrence.MethodsThyroxineodelrespectively.Thenthemodelmiceorcells.Thelevelofgenesexpressionororethanthenormalgroup'sand"Yang"deficientgroup’s,butthedifferenceorproliferationalgroupand"Yang"deficientgroup(P<0.05).Conclusion"Yin"deficientphysiquecanacceleratetumorgr

3、oechanismmaybethatitincreasesthePAgeneexpressionintumorcells.  Keyorbearingmicein"Yin"and"Yang"deficient;Tumorg/支)苏卫药准字(1982)第241701号,批号:20010302,扬州制药厂生产;甲状腺素,批号:0607501。利血平,SIMGA公司,批号:2000497。仪器:低温高速离心机,BECKMEN;PCR扩增仪GeneAmpPCRsystem9700(ABI)、凝胶成像系统Fluorchem9900(Alphainnotech);试剂:TRIZOL试剂盒购自上海

4、生物工程技术公司;M-MLVReverseTranscriptionKIT购自上海晶美生物技术公司;MIX:上海晶美公司;其余的试剂均为分析纯  1.2方法  1.2.1动物模型的制备阴、阳虚模型参阅郑里翔[7],造模后根据阳虚症状的客观指标:怕冷、畏寒喜暖、四肢不温或厥逆、小便清长、脉细、舌淡胖、倦缩拱背、精神萎顿、消瘦等确定模型成功与否;而阴虚组症状给药第1~2天无明显变化。第3~4天开始出现躁动不安、皮毛汗湿尤以夜间为甚,大便或干或湿,饮食量无明显改变,第5天肛门红,24h饮水量增加。第6~7天起出现日间神疲少动,体重减轻,清瘦,确定模型成功。  1.2.2肿瘤模型建立于超净工

5、作台中,先取S180肉瘤瘤液0.1ml,以生理盐水20倍稀释,光学显微镜下计算1ml瘤液中活体瘤细胞数,以此计算瘤液的稀释倍数,用生理盐水稀释成2×106个/0.2ml。置于冰中保存,75%酒精消毒小鼠右腋皮肤,按每鼠0.2ml接种于小鼠右腋皮下,10日处死小鼠并称体重,严格按标准剥离干净皮下肿瘤组织,使用电子秤称量瘤重(精确到0.01g),并迅速放到液氮中。  1.2.3Trizol试剂提取总RNA提取冷冻组织(约0.1g)剪碎后加入液氮后碾成粉末,加1mlTrizol,彻底混匀。加0.3mI氯仿,用力摇匀后离心。取上清,加1mI异丙醇沉淀水相中的RNA,得到的RNA经75%乙醇漂

6、洗后溶解于DEPC水中。用紫外分光光度仪测总RNA的纯度及浓度(波长260/280nm)。RT—PCR的方法:首先逆转录cDNA,进行PCR扩增,PCR反应混合物总体积50ul。PCR引物、反应条件(见表1)。PCR反应产物在1%的琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下摄像,以β-actin为内参,用凝胶成像分析系统进行半定量分析。表1引物、产物大小及条件(略)  1.3统计学方法各数据均以±s表示,,应用SPSS11.5统计分析软件处理实验数据,组间用t检验。  2结果  2.1接种瘤株的第10天,称老鼠重量,处死,剥离瘤块,称取瘤重从表2的结果来看,3组之间老鼠的重量,无论在接种瘤株时,还是取

7、瘤块时,阴虚组、阳虚组小鼠的体重均比正常组轻(P<0.05),而瘤重3组之间并没有明显差异(P>0.05),但阴虚组的瘤重要高于其余两组,提示:阴虚体质情况下,更有利于肿瘤的生长。表2造模型前后及取瘤块前后小鼠重量(略)表3阴虚、阳虚小鼠接种S180第10天各组瘤重(略)  2.2瘤块中PA、TOPIIa、DNApola的表达产物剥离出瘤块后,迅速放入液氮中保存,再用TRIZOL提取总RNA,经逆转录后的产物,经1%的琼脂糖凝胶电泳,半定量分析3个基

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