玉屏风散对s180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响

《玉屏风散对s180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、玉屏风散对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响【关键词】玉屏风散荷瘤小鼠免疫功能　　玉屏风散出自元·朱丹溪的《丹溪心法》,由黄芪、白术和防风等组成,具有益气固表、扶正止汗、祛风御风等功效。前期研究发现玉屏风散对免疫抑制模型小鼠的免疫功能具有明显的促进作用[1]。众所周知肿瘤的发生、发展与宿主的免疫系统功能密切相关,二者互为因果,肿瘤患者往往存在免疫抑制,抵抗力下降、反复感染等问题,因此提高肿瘤患者机体的免疫功能,对于肿瘤的防治具有十分重要的意义。本研究中我们探讨了玉屏风散的抗肿瘤效果以及对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用,

2、为进一步开发免疫增强剂的抗肿瘤药物提供参考。　　1材料和方法　　1.1材料C57BL/6纯系小鼠,雌雄各半（体质量18～22g）购自吉林大学实验动物中心。S180细胞株购自中科院上海细胞库,于牡丹江医学院病原生物学研究室昆明鼠腹腔接种传代。YAC1细胞株购自中科院上海细胞库。一氧化氮检测测试盒购自深圳晶美生物工程有限公司。RPMI1640培养基为美国Gibco公司产品。刀豆蛋白A（ConA）、MTT为Sigma公司产品。　　1.2方法　　1.2.1玉屏风散煎剂的制备按《中华人民共和国药典》的标准取黄芪、防风和白术常规煎

3、煮3次,去渣、混合、浓缩配成1kg/L的玉屏风水煎液。　　1.2.2动物分组与处理C57BL/6纯系小鼠36只,适应性饲养3d后,随机分成3组,每组12只（雌雄各半）:（1）正常对照组（NC）;（2）荷瘤对照组(CC);（3）玉屏风散治疗组(Y)。除正常对照组外,其余二组于左前肢腋下皮下注射2×109/LS180瘤细胞悬液0.2mL,接种24h后开始灌胃给药,玉屏风水煎剂组每只小鼠给以25g/(kg·d)玉屏风水煎剂灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃,连续灌胃给药12d,于第13天处死小鼠进行相关检测。　　1.2.3对荷

4、瘤小鼠体内抑瘤作用的观察实验小鼠于末次给药24h后处死。剥离瘤体,称量瘤体湿重,按下列公式计算抑瘤率。抑瘤率＝[对照组平均瘤质量（mg）－实验组平均瘤质量（mg）]/对照组平均瘤质量（mg）×100%。　　1.2.4NK细胞杀伤活性的规定实验小鼠于末次给药24h后脱颈处死,无菌取脾,常规制作脾细胞悬液,调整细胞密度5×109/L;另将连续传代培养之靶细胞YAC1细胞,密度调为2.5×108/L,各取100μL加入96孔板(效靶比20∶1),3复孔,另设效应细胞对照孔、靶细胞对照孔,37℃、50mL/LCO2孵箱培养20

5、h离心弃上清100μL,加入MTT应用液(5g/L)10μL,再继续培养4h,加入溶解液DMSO100μL,充分吹打至甲臜颗粒完全溶解后,酶标仪测定A595值,按公式计算NK活性。NK细胞活性=[靶细胞对照孔A595值－(实验孔A595值－效应细胞对照孔A595值)］/靶细胞对照孔A595值×100%。　　1.2.5小鼠腹腔巨噬细胞NO产生能力及吞噬功能测定实验小鼠于末次给药24h后处死,常规制备腹腔细胞悬液,调整细胞密度为2×109/L,将该细胞加入24孔培养板内,每孔1mL。37℃、50mL/LCO2贴壁3.5h,倾

6、去上清液,洗涤细胞3次,除去非黏附细胞,加入EDTA重新悬浮细胞,用含有10mL/LFCS的RPMI1640培养液调细胞密度至1×109/L。37℃、50mL/LCO2培养24h后,收集各组培养上清液,使用比色法试剂盒测定NO,按说明书操作［2］。另将2×109/L腹腔巨噬细胞加入96孔细胞培养板内,每份样品设3复孔,每孔100μL。在恒温37℃、50mL/LCO2培养箱中培养4h后,每孔加入100μL、4g/L中性红生理盐水溶液,继续培养4h。取出培养板,用0.01mol/L,pH7.4的PBS清洗3次,每孔加入0.2

7、mL巨噬细胞裂解液。经4℃3h后,用酶标仪测定A540值［3］。　　1.2.6T细胞增殖能力的测定采用MTT比色法［4］,常规制作实验小鼠脾细胞悬液,调整细胞密度至5×109/L,加入96孔细胞培养板中,100μL/孔,再加入ConA100μL/孔,使其终浓度为6mg/L,置于37℃、50mL/LCO2培养箱68h。取出,从每孔中吸出80μL上清后。加入5g/LMTT10μL/孔,置培养箱内4h。取出,加100g/LSDSHCl溶液100μL/孔,振荡过夜,用酶标仪测定A570值。以各样本A570值代表T细胞增殖能力。

8、　　1.2.7脾细胞产生IL2能力测定采用丝裂原激活淋巴母细胞法［4］,无菌摘取脾脏,常规制作脾细胞悬液,调整细胞密度至5×109/L,加入24孔细胞培养板中,1mL/孔,再加入ConA使其终浓度为6mg/L,置于37℃、50mL/LCO2培养箱48h。吸出上清,以3000r/min离心10min。取出上清即为粗制