玉米孤雌生殖单倍体胚遗传转化体系建立的初步研究

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1、分巧号Ｓ５１３学号Ｓ２０１２２０４９四川巧业大学ｄｂｒ位论文玉米孤雌生殖单倍体胚遗传转化体系建立的初步研究陈巧指导教师巧光堂巧巧林海建副研巧员‘■？学科专业作物遗传育种＇＇，研究方向玉乂单倍体育种，Ｉ．，？■、、■￣、２０１５年５月Ｖ？＼ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＭａｓｔｅｒＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＰｒｅｌｉｍｉｎａｒＳｔｕｄ０凸ｔｈｅＥｓｔａｂｌｉｓｈｍ

2、ｅｎｔｏｆｙｙＧｅｎｅｔｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎＳｓｔｅｍｉｎＭａｉｚｅｙＰａｒｔｈｅｎｏｅｎｅｓｉｓＨａｌｏｉｄＥｍｂｒｏｓｇｐｙＣｈｅｎＱｉ（ＣｒｏｐＧｅｎｅｔｉｃａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ）Ｄ－－ｉｒｅｃｔｅｄｂＰａｎＧｕａｎｔａｎａｎｄＬｉｎＨａｉｉａｎｙｇｇｊＭａ２０１５ｙ论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的化方外，学位论文中不包含其他

3、个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机一构的学位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＾研究生签名：年备月ｒ曰、Ｉ巧＾口了关于论文使用巧巧的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使Ｗ学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被巧阅和借阅，可Ｗ采Ｗ影印、缩印或扫描巧复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业火学可Ｗ用不同方式化不同媒体上发表、

4、传播学位论文的全部或部分内容。。□本论文保密，在解密后适用本授权。囚本论文不保密＿年＂＂（请在Ｗ上□内划Ｖ）＇＾，研究生签名：戸辯年《月ＪＴ曰导师签名：年／月日一ｒｊ摘要本研究将玉米孤雌生殖单倍体胚作为外植体，在二倍体胚的遗传再生与转化条件的基础上对部分条件进行优化，成功摸索出单倍体幼化培养中的倍性鉴定方法，成功获得了单倍体再生植株和转基因阳性植株，初步建立了孤雌生殖单倍体幼胚遗传再生体系和转化体系；与此同时，利用单倍体成熟胚作为受体进行遗传转化，不经成熟胜一较为困

5、难的脱分化过程而直接再生为单倍体植株。本研究探索了套新的转基因方法，一个新的可能和方向为单倍体育种的应用提供了。同时，本研究还对转基因过程中单倍体、二倍体与杂合体之间的亚细胞结构差异进行了比较分析，为单倍体遗传转化体一系的建立提供了定的理论支持。具体地，本研究得到如下结果：８－民为母（１）本实验Ｗ玉米孤雌生殖诱导系ＥＤＩ为父本，１５９９本杂交诱导单倍体，利用诱导系标记基因的特性对幼化诱导后的愈伤组织进行光照条件的筛选，发现杂合个体的愈伤组织呈现出紫色，而单倍体个体的愈伤组织仍为黄色，且光照方式

6、对筛选单倍体个体的效果不显著，而光照时间间的差异达到了极显著水平，其中２０ｈ、４０ｈ下可成功分离筛选出单倍体愈伤组织。但由于４０ｈ水平下，愈伤组织出现了变绿，由朝分化方向发展的趋势，不利于后期实验的培养，因此最终确定单倍体愈伤组织初步筛选的光照条件为光照培养２０ｈ，光照强度２０００１Ｘ。（２）由于光照筛选不能完全将非单倍体剔除，标记基因的显现与植株组织的基因型一及成熟度有关，因此我们还需进步准确地确定出单倍体个体，本实验利用经光照筛一选后再通过染色体压片筛选、流式细胞检测筛选这样套单倍

7、体鉴定的方法，最终从３０００颗幼化中获得１１０份单倍体材料，单倍体率为３．６７％，与诱导系ＥＤＩ的诱导率一３。（．５％）相近，从而实现对材料致性的保证（３）本实验通过对分化过程中的激素配比进行正交设计优化，我们发现处理（ＫＴ（０．－＋Ｎ５ｍ／Ｌ）＋６－ＢＡ／／Ｌ）＋２４Ｄ（１ｍ／Ｌ）ｍ／Ｄ）（０．５ｍＬ）＋ＡＢＡ（０．５ｍＡＡ（０．１ｇｇｇ，ｇｇ的单倍体成苗率显著高于其他组合，且对不同因素的不同处理浓度进行分析，结果均不显著。因此，对其中的不显著因素须将不同因素的水平梯度

8、设定范围加大，从而筛选出主要因素的最佳水平。８－（４）本实验通过对１巧９民单倍体幼胚诱导的愈伤组织进行再生和转化，成功地获Ｉ得了１３株再生单倍体植株、１５株再生双单倍体植株及４个单倍体阳性个体。本实验－利用授粉口１４ｄ左右的扭１１单倍体成熟脏进行转化，转化后直接再生成为植株，跳１４过了成熟胚困难的愈伤组织诱导及培养阶段