蝴蝶兰、文心兰再生体系的建立及遗传转化体系的初步研究

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1、广西大学硕士学位论文蝴蝶兰、文心兰再生体系的建立及遗传转化体系的初步研究姓名：满若君申请学位级别：硕士专业：作物栽培学与耕作学指导教师：杨丽涛;李杨瑞20070628蝴蝶兰、文心兰再生体系的建立及遗传转化体系的初步研究摘要本试验主要以蝴蝶兰、文心兰作为材料，建立了蝴蝶兰、文心兰的高频再生体系，并在此基础上进行了农杆菌介导的GUS基因的转化，利用共培养后组织化学染色法分析探讨了影响转化效率的各种因素，初步优化了遗传转化体系。主要结果如下：1．蝴蝶兰幼嫩花梗原球茎状体诱导率较高，培养基MS+6-BA5．0rag／L+NAA0．5mg／L诱导率最高，达100％；原球茎增殖的最佳培

2、养基MS+6-BA3．0mg几+NAA0．2mg，】L+TDZ0．2mg／L，增殖系数达2．3；原球茎块在培养瓶内有群体优势效应，切块3．0mm时增殖系数最大：添加6-BA和NAA的1／2MS有利于生根，平均根数达到3．2条；室内炼苗3d+室外炼苗3d有利于移栽，移栽成活率达90．0％。2．以文心兰花梗为材料，在NAA1．0mg／L+6-BA0．2mg／L+TDZ0．3mg／L的培养基上，愈伤组织诱导率最高，可达78％，诱导率受[NAAI／16-BA]的浓度比和光照强度的影响；在6-BA0．4mg／L+NAA0．2mg／L的激素组合下，从愈伤组织分化出幼苗的形成率和商品化率

3、可达到最佳效果；中、低无机盐浓度且全量的基本培养基较利于幼苗分化；当分化形成的幼苗株高为1．2cm时，可迸一步壮苗生根，生根苗在适宜条件下移栽，成活率可达99％以上。3．以蝴蝶兰原球茎为外植体进行农杆菌介导，优化的转化条件为预培养时间3d，菌液侵染浓度OD600--0．3，菌液侵染时问10min，pH值-5．4，侵染后，与农杆菌共培养5d并添加100ILtmol／LAS，瞬间表达率最高．4．将适宜蝴蝶兰遗传转化的条件运用于文心兰，仅能得到较低的转化率．关键词：蝴蝶兰文心兰组织培养农杆菌介导遗传转化nPRELIMINARYSTUDIESONREGENERATIoNANDTRA

4、NSFoRMATIoNSSYSTEMSoFPHALAENOPSISANDoNCIDIUMABSTRACTThehighfrequencyregenerationsystemofPhalaenopsisandOncidiumwereestablished．andthenusedfortransformingGUSgenemediatedbyAgrabacteriumtumefaciens．Manyfactorsaffectingthetransformationfrequencieswerestudiedandtransformingsystemswerepreliminar

5、ilyestablishedbyhistologicaldetectionofGUS●c6Vi锣afterco-cultlvation．Themainresultswere-sfollows：1．ThepedicleaxiliarybudofPhalaenopsisproducedhigherpercentageofPLBwiththehighestpercentageupto100％OllMSmediumsupplementedwithMS+6-BA5．0mg／L4-NAA0．5mg／L．TheoptimalmediumfortheproliferationofPLBwa

6、sMSmediumwith6-BA3．0mg／L，NAA0．2mg／L，TDZ0．2mg／Landthehighestproliferationratereached23．ThevolumeofPLBaffectedtheproliferationrateofPLB．andPLBof3．0mmindiamerergave●highestpercentageupto2．3．The1／2MSmediumwith6-BAandNAAwasbeneficialfortherootingwithaveragerootingrateof3．2．Beforetransplantingto

7、pots，theplantletstreatedfor3dinroomandthen3dinthegreenhousegavethehighestsurvivalrateupto帅％．2．CallusinductionwMmainlyeffectedby[NAAI／16-BAIandIightintensity,andthetoppestcallusformingreached78％whentightintensitywas250IxonMSmediumsupplementedwithNAA1．0mg，L+6-BA