猪卵母细胞成熟过程中perilipins和pparγ作用机制的研究

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1、分类号：单位代码：密级学号：学位论文猪卵母细胞成熟过程中和作用机制的研究研究生：张瑞娜指导教师：朱士恩教授合作指导教师：傅祥伟副教授串请学位类别：农学博士专业领域名称：动物遗传育种与繁殖学研究方向：配子与胚胎生物技术所在学院：动物科技学院二零一五年五月分类号：单位代码：密级学号：学位论文猪卵母细胞成熟过程中和作用机制的研究研究生：张瑞娜指导教师：失士恩教授合作指导教师：傅祥伟副教授串请学位类别：农学博士专业领域名称：动物遗传育种与繁殖学研究方向配子与胚胎生物技术所在学院：动物科技学院二零一五年五月ChinaAgriculturalUniver

2、sityPh.DDissertationThestudyofPerilipinsandPPARgammamechanismduringporcineoocytematurationCandidate:ZhangRuinaSupervisor:Pro.ZhuShienCollegeofAnimalScienceandTechnologyChinaAgriculturalUniversityBeijing100193项目资助情况本研究由国家科技支撑计划项目编号：资助国家“”项目项目编号：“”独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进

3、行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：时间：年月日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中

4、国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）学位论文作者签名：如、，时间：純年月日摘要猪卵母细胞和胚胎细胞内以脂滴的形式储存大量的内源性脂质，这些脂质为卵母细胞及早期胚胎发育供能。本研究旨在探讨猪卵母细胞成熟过程中脂滴相关蛋白（和的表达定位，及上游转录闪子过氧化物酶增殖活化受体（活化对卵母细胞发育的影响。实验一采用实时定量、和免疫荧光染色检测猪卵母细胞成熟前后和的表达和定位。结果显示，猪卵母细胞成熟前后不表达但稳定存在，且蛋白在卵母细胞内的表达显著低期卵母细胞。蛋

5、白与染色的脂滴呈现完全共定位的现象。这些结果证明是猪卵母细胞内的一种土要的脂滴相关蛋白。另外，实验进一步检测猪卵母细胞成熟前后的表达，及激活剂曲格列酮（对表达的影响，结果表明：猪卵母细胞内的表达显著升高且可显著下调猪卵母细胞内的水平。实验二研究活化对猪卵母细胞发育的影响及其调节途径。将不同浓度的添加至猪卵母细胞体外成熟体系中，结果显示添加可显著提高猪卵母细胞的核成熟率±±尸。进一步检测在成熟不同阶段（前后及全程添加对核成熟的影响，结果表明全程添加可显著提高卵母细胞的核成熟率（±±户。之后，检测添加对卵丘扩展直径及卵母细胞发育能力的影响。结果表

6、明，添加组的卵扩展直径（叫±和孤雌激活胚的卵裂率±及囊胚率（±与对照组均无显著性差异户。最后，检测和是否参与调节的促成熟效应。结果表明，只有在和存在的条件下，可显著提高卵母细胞的核成熟率（±士尸。实验二采凡法对猪期卵￡卵母细胞复合体（进行玻璃化冷冻，检测冷冻对卵母细胞发育过程中水平的影响。结果显示，冷冻组体外培养至后，卵母细胞的存活率士、极体排出率士、激活后的卵裂率±和囊胚率（±都显著低于新鲜组（尸。另外，新鲜组的卵母细胞内水平变化正常：即体外发育时卵母细胞内水平出现峰值，显著下降并维持至冷冻组的卵母细胞内存在积累的现象，且体外培养时卵母细胞

7、内出现峰值，时又显著下降。综上所述，是猪卵母细胞内一种关键的脂滴相关蛋白，参与卵母细胞成熟过程中的脂滴动态重组。和协同促进的促成熟效应。冷冻引起卵母细胞内积累是导致卵母细胞发育能力降低的原闪之一。关键词：卵母细胞，脂滴，和玻璃化冷冻AbstractPorcineoocytesandembryoscontainhighlevelsofendogenouslipids.Lipidswererepresentedanimportantsourceofenergyduringoocytedevelopmentandinsustainingthegro

8、wthoftheembryoduringpreimplantation.Thepresenceofperilipinsremainsunclearinporcine