芪蛭降糖胶囊改善ⅱ型糖尿病大鼠视网膜病变的作用及机制研究

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1、芪蛭降糖胶囊改善Ⅱ型糖尿病大鼠视网膜病变的作用及机制研究TheeffectandmechanismofQizhiJiangtangCapsuleprotecttheretinaoftype2diabeticrats作者姓名：张超专业名称：微生物学指导教师：王放教授学位类别：理学硕士答辩日期：2015年5月20日中文摘要芪蛭降糖胶囊改善Ⅱ型糖尿病大鼠视网膜病变的作用及机制研究糖尿病（Diabetes，DM）是一种以胰岛素分泌不足和利用障碍为主要特点的一种代谢性疾病，其早期症状主要为高血糖引起的“三多一少”，而Ⅱ型糖尿病在持续高糖脂代谢紊

2、乱的条件下，常累及全身多器官，例如眼、肾、心血管等。视网膜病变是Ⅱ型糖尿病一种最常见的并发症，主要由于持续的高血糖高血脂引起的血管功能减退，内皮系统受损导致视网膜发生病变。目前Ⅱ型糖尿病眼病已成为世界范围内致盲的主要原因之一。Ⅱ型糖尿病性视网膜病变（Diabeticretinopathy，DR）是一种重要的Ⅱ型糖尿病并发症，严重时可致盲。早期血糖升高引起晶体渗透压改变，屈光度发生变化，进而导致视力下降或视物模糊，若不及时治疗，继而出现新生血管及纤维增殖，二者引起视网膜脱落，造成永久性眼部损伤。由于其发病机制较复杂，引起后果十分严重，已

3、的得到医疗界广泛关注。芪蛭降糖胶囊主要成分为黄芪、地黄、黄精、水蛭，主要用于治疗Ⅱ型糖尿病及其并发症。其广泛应用于对Ⅱ型糖尿的治疗中，已有研究证实其对糖尿病肾病有显著疗效，但是其对于DR的作用未见报道，研究芪蛭降糖胶囊对DR的疗效及治疗机制。我们以糖尿病大鼠模型及脐静脉内皮细胞（HUVEC）氧化损伤模型研究芪蛭降糖胶囊对糖尿病视网膜病变的治疗作用及其作用机制。体内实验将大鼠给予高脂饲料喂养，联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型。将Ⅱ型糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组、芪蛭降糖胶囊低、中、高剂量组、参芪降糖颗粒阳性对照组

4、，另加正常对照组。药物治疗后，通过对视网膜的HE染色及免疫组化技术，观察药物对糖尿病大鼠视网膜的影响；分离血清检测大鼠脂代谢水平变化；ELISA检测大鼠血清中血管内皮长因子（VEGF）、前列环素2（PGI2）、血管性血友病因子（vWF）蛋白表达量的变化；体外部分以H2O2损伤HUVEC建立氧化损伤模型，分为正常对照组、氧化损伤模型组、芪蛭降糖胶囊低、中、高剂量组。I经芪蛭降糖胶囊干预后，MTT法观察芪蛭降糖胶囊作用前后经H2O2损伤的HUVEC存活率变化；流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）的含量变化；酶联免疫吸附试验（Enzyme-

5、linkedimmunosorbentassay，ELISA）检测上清液一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、超氧化物歧化酶（SOD）和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达量变化；实时定量PCR（RT-PCR）检测细胞内前列环素2（Bcl-2）、内皮素-1（ET-1）、及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的mRNA水平。结果发现，体内芪蛭降糖胶囊低、中、高剂量组及参芪降糖颗粒阳性对照组视网膜HE染色未见明显变化，但是视网膜免疫组化染色发现芪蛭降糖胶囊中、高剂量组药物作用组VEGF和ANG-2表达量与糖尿病模型组相比显著降低；脂代谢水平

6、检测发现，芪蛭降糖胶囊低、中、高剂量组及参芪降糖颗粒阳性对照组大鼠脂代谢水平较糖尿病模型组大鼠有明显改善；与糖尿病模型组比较，芪蛭降糖胶囊低、中、高剂量组药物作用组及参芪降糖颗粒阳性对照组均可使糖尿病模型大鼠血清PGI2蛋白表达量升高、VEGF及vWF蛋白表达量降低。体外氧化损伤的HUVEC模型研究发现，与模型组相比芪蛭降糖胶囊低、中、高剂量组均可明改善（过氧化氢）H2O2对HUVEC的氧化损伤；降低细胞内活性氧（ROS）浓度；升高细胞上清液中NO、NOS、SOD和VEGF蛋白表达量；上调细胞内Bcl-2及eNOSmRNA表达量；同时

7、下调ET-1及NOX-4mRNA表达量。研究证实，芪蛭降糖胶囊可通过改善Ⅱ型糖尿病患者脂代谢水平以及视网膜血管内皮状况并且抑制视网膜新生血管形成，达到防治Ⅱ型糖尿病视网膜病变的作用。关键词：Ⅱ型糖尿病、糖尿病视网膜病变、血管内皮、氧化损伤、炎症IIAbstractTheeffectandmechanismofQizhiJiangtangCapsuleprotecttheretinaoftype2diabeticratsDiabetes(diabetes,DM)isakindofmetabolicdisease,asthemaincha

8、racteristicsofinsufficientinsulinsecretionandobstructionofutilization.Thetypicalsymptomsofdiabetesis“Threemore