维生素c对牛早期胚胎发育影响及体细胞克隆牛影响因素研究

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1、维生素C对牛早期胚胎发育影响及体细胞克隆牛影响因素研究StudiesoftheEffectsofVconBovinepre-implantationEmbryoDevelopmentandtheFactorsAffectingSCNTCloned-Cattle作者姓名：王爱兵专业名称：基础兽医学指导教师：张学明教授学位类别：农学硕士答辩日期：2015年6月6日内容提要卵母细胞体外成熟（invitromaturation,IVM）和体细胞克隆（somaticcellnucleartransfer,SCNT）技术在动物繁殖领域的应用已经

2、十分广泛，但在实际生产和试验研究中仍存在许多问题。如IVM卵母细胞质量不如体内自然正常发育的卵母细胞，且其胚胎发育能力也不如体内胚胎；SCNT胚胎的发育及克隆动物生产效率低下，克隆胚胎妊娠率低、克隆胚胎流产率高等因素导致克隆犊牛出生率低，出生的克隆牛存活率也低，且大多数都有异常等。本试验研究了维生素C（VtiaminC,Vc）对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响及影响体细胞克隆牛生产效率的因素。结果表明：（1）卵母细胞成熟液中添加浓度为50µg/mL的Vc，可以提高卵母细胞的体外成熟率；成熟液中添加不同浓度的Vc体外成熟培养卵母细胞，各组

3、间孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率没有显著差异；胚胎培养液中添加不同浓度的Vc培养体外受精胚胎，20µg/mLVc组能显著提高胚胎的卵裂率，各组间的囊胚率无显著差异，多能性相关基因的表达有所差异；成熟液和培养液中同时添加Vc能够提高体外受精胚胎的卵裂率，不影响囊胚形成率和囊胚的总细胞数，但促进了多能性相关基因的表达；（2）体细胞克隆牛生产效率的影响因素方面，移植胚胎的数量以2枚胚胎最适宜；胚胎移植的季节应选在春、秋两季；受体牛应选择黄体等级为A、B级的母牛作为受体。本试验从卵母细胞的成熟培养、胚胎的体外发育、体细胞克隆牛生产等方面，系统研究

4、了Vc对卵母细胞成熟和胚胎发育的作用，以及影响克隆牛生产效率的多种因素，对卵母细胞成熟和体细胞克隆进行了有益的探讨，为卵母细胞IVM和克隆牛生产研究提供了有利的依据。I中文摘要维生素C对牛早期胚胎发育影响及体细胞克隆牛影响因素研究牛卵母细胞体外成熟和体细胞克隆牛生产效率受多种因素的影响。为获得高质量的牛卵母细胞，提高克隆牛生产效率，本研究探讨了不同浓度维生素C（VitaminC,Vc）对牛卵母细胞体外成熟的作用，以及胚胎移植数量、移植季节和受体牛生理状况等因素对体细胞克隆牛生产效率的影响。结果显示：（1）体外成熟液中添加50µg/m

5、LVc能够显著提高牛卵母细胞的成熟率，对孤雌胚胎的发育能力无显著影响；体外培养液中添加20µg/mlVc可以提高体外受精胚胎的卵裂率，对囊胚形成率无显著影响，但能促进囊胚多能性基因的表达；在体外成熟液和培养液中分别添加50µg/mL和20µg/mLVc，体外受精胚胎的卵裂率最高，囊胚期多能性基因的表达量显著提高；不同浓度Vc能影响胚胎细胞凋亡基因的表达，但抗细胞凋亡的作用不显著；（2）移植2枚胚胎比移植1枚胚胎和3枚胚胎能获得较高的妊娠率、较低的流产率和较高的产犊率；在春、夏和秋季（5-9月）进行胚胎移植的效果显著优于冬季（12-1

6、月）；A、B级黄体受体牛的妊娠率显著高于C级黄体受体牛的妊娠率。结果表明，Vc能够影响卵母细胞的体外成熟和体外受精胚胎的质量；胚胎移植数量、移植季节和受体牛生理状况均能显著影响克隆牛的生产效率。本研究优化了牛卵母细胞体外成熟技术和体细胞克隆牛生产程序，为进一步提高牛卵母细胞质量和克隆牛生产效率提供了理论和实验依据。关键词：维生素C；卵母细胞；牛；克隆；体细胞核移植IIAbstractStudiesoftheEffectsofVconBovinepre-implantationEmbryoDevelopmentandtheFactor

7、sAffectingSCNTCloned-CattleInvitromaturation（IVM）ofbovineoocytesandproductionefficiencyofclonedcattlebysomaticcellnucleartransfer(SCNT)areaffectedbymanyfactors.InordertoobtainbovineoocytesinhighqualityandimprovetheproductivityofSCNTcloned-cattleTherolesofdifferentconce

8、ntrationsofvitaminC(Vc)andtheeffectsoffactorslikenumberoftransferredembryos,seasonalchangesandphysiologicalconditions