禽呼肠孤病毒p17蛋白在细胞中的定位与其诱导的自噬以及病毒复制相关

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2、及病毒复制相关务心終．績繼‘雌是￣指导教师姓名：吴艳涛教授，扬州大学，江苏扬州，２２５００９申请学位级别；硕壬学科专业名称：微生物学；Ｖｉ论文提交日期＇＇：２０１５年６月论文答辩日期；２０１５年６月２曰＾Ｊ；＇学位授予单粒扬州大授予日期：．争．．＿学位＿罰键服＇－ｒ、：戴亚斌研究员、答辩委员会主席．＼ｊ＾■．－、乂．．．＇？Ｔ＇，＇＊．Ｉ．、＊＊＊、．一■，威丢＇－处真教終郑苗＾１５年６月－若－了５為气户碟＼：台：；令＇姨获Ｃ屯、弯铅導聲麵禽呼肪孤病毒ｐ１７蛋白在细胞中的定位与其诱导的

3、自膛Ｐ乂及病毒复制相关Ｎｕｃｌｅａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｌ７ｒｏｔｅｉｎｏｆａｖｉａｎｒｅｏｖｉｒｕｓｉｓｐｐｃｏｒｒｅｌａ化ｄｗｉｔｈａｕｔｏｈａｉｎｄｕｃｔｉｏｎａ田ｄａｎｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｖｉｒａｌｐｇｙｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ研巧生：李晨犧专业；微生物学导师：吴艳涛教授扬州大学兽医学院２０１５年６月１李晨犧：禽呼肠孤病毒ｐ７ｌ蛋白在细胞中的定位与其诱导的自嗤化及病毒复制相关禽呼肠孤病毒ｐｌ７蛋白在细胞中的定位与其诱导的自隘从及病毒复制相关研充生：李晨犧导师：吴艳涛教授

4、摘要禽呼肠孤病毒（ａｖｉａｎｒｅｏｖｉｍｓ，ＡＲＶ）属于呼肠孤病奉科（民ｅｏｖｉｒｉｄａｅ）正呼肠孤病毒属（Ｏｒｔｈｏｒｅｏｖｉｍｓ），是禽类重要的病原体。病毒基因组是由１０个节段的双链ＲＮＡ組成，可分为大化）、中（Ｍ）、小（Ｓ）３组，主要编码１０种结构蛋白和４种非结构蛋白。其中，ｐｌ７蛋白是由ＡＲＶＳ１基因第二个开放阅读框编码的非结构蛋白，包含１４６个氨基酸，大７。ｌ－Ｃ。小约为１ｋＤ由先前的研究可知，ｐ７是细胞核细胞质穿梭蛋白，其端有核输入信号而ｐｌ７在核质中的分配与细胞的转录活性有关，且出核并不依赖于ＣＲＭ１蛋白。ｐｌ７可通过ＰＴＥＮ、ＡＭ

5、ＰＫ和ＰＫＲ／ｅＩＦ２ａ信号通路正调控细胞自隨，并增强病毒的复制。在调控。细胞周期和宿主细胞翻译方面，ｐｌ７蛋白可Ｗ通过激活ｐ５３通路来阻碍细胞的生长因此，一ｐｌ７蛋白是种多功能病毒蛋白，它在调控细胞自歷、细胞周期Ｗ及蛋白翻译方面都起着重要的作用。尽管如此，目前对ｐｌ７蛋白功能的研究仍然还存在许多未知的地方。本研巧通过鉴定ｌ７蛋白的核输入信号与核输出信号，并突变ｌ７蛋白核输入信号相关的功能氨ｐｐ基酸位点后，探巧ｐｌ７蛋白的细胞定位对其诱导的细胞自唆的影响Ｗ及对病毒复制的影响。１７．禽呼肠孤病毒ｐｌ蛋白核输入信号与核输出信号的鉴定－本研究首先将ｐｌ７

6、蛋白基因插入真核表达载体ｐＥＧＦＰＣｌ中，在宿主细胞中表达融合－蛋白ＧＦＰＰ１７，建立了绿色费光蛋白标记的细胞定位的方法。所得结果也与文献报道中的一一ｐｌ７蛋白定位致，也于ＡＲＶ感染后的间接免疫英光实验致，说明本方法可Ｗ用于ｐｌ７－蛋白定位的研究。同时，选取转染ＥＧＦＰｌ７后的不同时间点（９ｈ、１８ｈ、２４ｈ、％ｈ、ｐｐ４８ｈ），观察ｐｌ７蛋白在细胞中的分布情况。此外，也与ｐｌＯ、ｏＮＳ另两个Ｓ基因组编码的非结构蛋白的定位进行了比较，结果也与蛋白在细胞中的定位不同。为鉴定ｐｌ７的核输入信号，参考文献中报道的序列，并将该序列中レ义及周围存在的几个连续的碱

7、性氨基酸进行突变，观察ｐｌ７突变体的细胞定位情况。发现突变ｐｌ７蛋白Ｃ端的第１２２和１２３位的氨基酸后，可使ｐｌ７蛋白的核定位发生改变，观察到大部分焚光进入扬州大学硕±学位论文细胞质中，从而确定这两个氨基酸在ｐｌ７蛋白的核定位中发挥着重要的作用。此外ｌ７，ｌ７，ｐ是核质穿梭蛋白目前的研巧仅知道ｐ蛋白可Ｗ出核，且出核途径是ＣＲＭ１蛋白非依赖的。本研巧通过软件预测与序列比对，在ｐｌ７蛋白的序列中找到多个疑似核输ＥＧＦＰ－Ｃ出信号的序列。将这些序列插入ｐｌ中