原发性胆汁性肝硬化患者外周血中滤泡辅助性t细胞及b细胞亚群的检测及其临床意义

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1、原发性胆汁性肝硬化患者外周血中滤泡辅助性T细胞及B细胞亚群的检测及其临床意义TheexpressionandclinicalsignificanceofcirculatingfollicularhelperTandBcellsinpatientswithwithnewlydiagnosedprimarybiliarycirrhosis作者姓名：王莉专业名称：内科学指导教师：姜艳芳副教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年6月2日前言原发性胆汁性肝硬化（Primarybiliarycirrhosis,P

2、BC）也称慢性非化脓性破坏性胆管炎，是一种以肝内胆管进行性破坏和血清中高滴度抗线粒体抗体（AMA）为主要特点的进展性自身免疫性肝病，可导致慢性胆汁淤积、肝纤维化及门脉炎症等，最终发展为肝衰竭[1-2]。熊去氧胆酸（UDCA）是唯一一个通过食品药品监督管理局批准的医学药物，能够延缓PBC的疾病进展，但治疗效果却不尽人意。越来越多的研究证实PBC与免疫、遗传、环境等因素均有密切关系[3-5]，其中潜在的免疫效应机制不断地受到人们的关注[6-9]。但是，T细胞在PBC发病过程中起何作用，尚不清楚。初始CD4+

3、T细胞在不同抗原刺激及环境影响下，可分化成不同的CD4+T细胞亚群，主要包括Th1、Th2、Th17、Th9、Treg、Th22等。长期以来，人们认为Th2是B细胞的辅助T细胞。2000年，Breitfeld等学者首次在人扁桃体组织中发现了一类定居于淋巴滤泡的新型细胞群，主要功能是辅助B细胞参与体液免疫应答、产生抗体等，因此称为滤泡性辅助性T细胞（Tfh）。不同的CD4+T细胞都会通过表达不同的细胞因子发挥不能的作用，如Th1通过分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α参与细胞免疫应答，清除胞内的细菌及病毒

4、；Th2通过分泌IL-4，IL-6，IL-10参与抗体介导的体液免疫应答如寄生虫感染机体；Th17通过分泌IL-17参与机体炎症反应；Tfh细胞通过表达表面功能分子如CXCR5、CD40L、ICOS、PD-1以及细胞因子IL-21协同B细胞诱导产生抗体，从而参与临床疾病的发生发展。有研究证明Tfh细胞不仅参与病毒性疾病如慢性乙型/丙型肝炎、HIV的疾病进展，而且与自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、重症肌无力等密切相关。因此，通过以上研究，我们推测Tfh细胞在PBC患者自身抗体及免疫球蛋的产

5、生中起到至关重要的作用。早在20世纪中期，国外学者通过实验证明了B细胞的主要功能是通过提呈抗原活化，完成免疫球蛋白的类别转换，分化成浆细胞或记忆性B细胞，分泌高亲和力的抗体，从而参与体液免疫应答[10-11]。新近研究发现，人和小鼠的BI细胞与PBC的发病进展有关，并且通过耗竭B细胞可以为治疗PBC患者提供一种新型的方法[12]。研究B细胞在PBC患者中的表达情况对延缓该疾病的进展起到重要作用。综上所述，PBC的病因及发病机制是十分复杂的。虽然有研究已经证实了B细胞及T细胞参与PBC的发生发展，但是目前

6、尚无关于PBC患者外周血中T细胞、B细胞及其亚群的表达水平的研究。因此，本研究旨在明确Tfh细胞及B细胞在PBC患者外周血中的表达情况及临床意义，为PBC患者的早期治疗提供新思路。II中文摘要原发性胆汁性肝硬化患者外周血中滤泡辅助性T细胞及B细胞亚群的检测及其临床意义目的：研究滤泡辅助性T细胞（Tfh）和B细胞亚群在原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者血清中的表达水平，并与免疫球蛋白及自身抗体等临床指标进行相关性分析，进一步探讨它们在PBC免疫应答中的作用。方法：分别采集58例初治的原发性胆汁性肝硬化（PB

7、C）患者以及30例健康对照者（Healthycontrols,HC）的外周血，应用流式细胞技术、酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测各组外周血中CD27+,CD38+,CD86+,CD95+B细胞和诱导性协同刺激分子（ICOS）+,程序性死亡-1（PD-1）+,IL-21+Tfh细胞的数量以及血清中Tfh相关的细胞因子IL-21的含量。应用华臣生物试剂公司酶比色法检测ALT、AST、ALP、GGT的水平；应用西门子医疗诊断产品检测IgA、IgM、IgG；应用R&D公司的ELISA方法检测AMA、AMA

8、-M2、ANA、CCP的含量。结果：1.PBC患者外周血中CD19+CD86+B细胞、CD19+CD95+B细胞、CD38+浆细胞以及CD3+CD4+CXCR5+ICOS+、CD3+CD4+CXCR5+PD-1+Tfh细胞和血清IL-21的水平明显高于健康对照组，而CD27+CD19+B细胞水平明显低于健康对照组（都P<0.05）；2.PBC患者外周血中CD3+CD4+CXCR5+ICOS+Tfh细胞分别与CD19+CD38+浆细胞和CD1