公共引物介导的多重pcr技术在细菌性脑膜炎诊断中的应用研究

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1、襄１牡考鉴ＳＯＯＣＨＯＷＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕±专业学位论文论文题目公共引物介导的多重ＰＣ民技术在细菌性脑膜炎诊断中的应用研究硏究生姓名段欠欠指导教师姓名孙万平专业名称药理学研究方向病原体分子诊断＊畑，曰苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声巧；所提交的学位论文是本人在导厮的猎导下，独立进斤研究工作所取得的成果。朦文中邑经往明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成黑也不當为获轉苏州大学或其巧

2、教育祝构的学位证书而锥用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人巧集棘，巧己在文中勤明确方式巧明。本人承担本声明的法律责任。玉．．论文作者签名；ＫｇＨ期；ＷＳｆｆｙ］衆州大学学位论文使用授歡声嘴本入完全了解家刹大攀关于收藥、保存剩使羯学俊讼变龄姨定，锁：学位论义證作较巧属簽州大学？本攀位论文电子文機的巧容巧纸＂一致、质论文的巧容相，苏巧大擎有较陶團家圈书馈中屬巧科膝文献僖息情推中也、中國科学敍术槪息研究巧（含巧充讚濕鬼子曲腹社）、中顧聲宋期刊（光魏朦）电子杂燕鞋送

3、交球学俊论文鞠餐印俾和电子文措，光许论义被簽阁鞠倦阁，可采用謬印、鑛印或其他餐鑛手段保存和汇编学化论文，巧臥将学值论文的全部或鎌分离容编入有关数瀑库进雜索。謗審论文口本学位论文属在年月解密腐遗用本幾定。非涉密论文咬因期５．论文作者签名；爷作：如气导爾签名？；類；户片公共引物介导的多重ＰＣＲ技术在细菌性脑膜炎诊巧中的应用研宛中文摘要公共引物介导的多重ＰＣＲ技术在细菌性脑膜炎诊断中的应用研究中文摘要一部分一第：种高效筛选公共引物的方法一。目的

4、：设计种筛选公共弓Ｉ物的方法一段人类庐ｆｌ方法；将３条正向引物和３条反向引物序列连接于ｃ渝基因序列两端ＭＤ１９－Ｔ９，将连接片段导入Ｐ载体构建重姐质粒，利用此质粒模板进行对引物的、、、敏感性检测。步骤包括；引物设计插入序巧的选择、酶切转化质粒提取敏感性检测。结果：区别９对公共引物的敏感性，筛选出灵敏性较高的公共引物对。、。结论：该方法操作简单离效和快速，可用于公共引物的高效筛选第二部分：筛选检測细菌性脑膜炎的公共引物一条适用于细菌性脑膜炎检测的多重目的：筛选出ＰＣＲ体系的公共引

5、物。方法：通过特异性比觀挑选出３条公共弓Ｉ物。运用髙效筛选公共引物的方法，‘对３对公共引物进行敏感性检测。２６３结果：ＵＰ１、ＵＰ２和ＵＰ３的特异性均较高，但敏感性分别为１０，１０，１０拷贝。结论：本次实验筛选出的ＵＰ１可优先用于多重ＰＣＲ体系的构建。第Ｈ部分：细菌性脑膜炎多重ＰＣＲ检测体系的设计与鉴定目的：导致细菌性脑膜炎的常见六种细茜为检测鞭标，建立新型具有高通＂＂量的公共引物介导的多重ＰＣＲ检测体系，研发适用于临床的细菌粗脑膜炎的检测试剂盒。方法：包括Ｓ部化（

6、１）质粒模板的构建：对目的模板和载体双酶切Ｗ后连接转化重组质粒进行菌落ＰＣＲ和测序鉴定（２）；多重体系的建立设计特异性引物和嵌合引物；确定扩増体系和反应条件；体系特异性检测；体系敏感性检测；（３）临床Ｉ中文摘要公共引物介导的多重ＰＣＲ技术在细菌性脑膜炎诊断中的应用研巧－－示本的检测：ＣＳＦ基因姐ＤＮＡ丰提取，用构建的ＵＰＭＰＣＲ体系进巧检测。－Ｍ－ＰＣＲ体系扩増範标序列时无非特异性带产生结果：嵌合引物和ＵＰ，Ｓ．ａａｌａｃｔｉａｅ．ｍｏｎｏｃｔｏｅｎｅｓＳ．ｎｅｕｍｏｎｉ

7、ａｅ，Ｎ．ｍｅｎｉｎｉｔｉｓ圧ｉｎｆｌｕｅｎｚａ．ａｕｒｅｕ，Ｌｇ，，ｇｙｐｇ巧Ｓ３２２４－－的多重体系敏感性检测结果分别为１妒，ｌＯ，１０，ｌＯ，ｌＯ和ｌＯ拷贝。运用ＵＰＭＰＣＲ体系进行临床标本的检测时，成功检出３例标本。－Ｍ－：ＵＰＰＣＲ检测结论本课题构建的体系具有较高的特异性和敏感性，可用于。检测细菌性脑膜炎病原体的检测，具有临床应用价值关键词：细菌性脑膜炎；多重ＰＣＲ；公共引物：弓Ｉ物筛选作者：段欠欠指导老师：孙万平ｎＡＭｕｌｔｉｐｌｅｘ

8、ＰＣＲＡｓｓａｙＭｅｄｉａｔｅｄｂＵｎｉｖｅｒｓａｌＰｒｉｍｅｒｓｆｏｒ＆ｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＢａｃｔｅｒｉａｌＭｅｎｉｎｉｔｉｓＡｂｓｔｒａｃｔｙｇ乂Ｍ山邸ｌｅｘＰＣＲＡｓｓａｙＭｅｄｉａｔｅｄｂｙＵｎｉｖｅｒｓａｌＰｒｉｍｅｒｓｆｏｒ化ｅＤｅｔｅｃ村ｏｎｏｆＢａｃｔｅｒｉａｌＭｅｎｉｎｇｉｔｉｓＡｂｓｔｒａｃｔＰａｒｔＩＡｎｏｖ过ｍｅｔｈｏｄｆｏ