昆母提取物对ra-hfls增殖及mapk信号转导通路的影响

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1、Ｒ２２２５７２分类号．３学校代号１０ＵＤＣ６１０密级公开学号２０１２２３０１００４？广州中《為大摩ＧｕａｎｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅｇｙ博士学位论文昆母提取物对Ｒ－ＨＦＬＳＭＡＰＫＡ增殖及信号转导通路的影晌学位申请人毛海琴指导教师姓名林昌松专业名称中医临床基础申请学位类型科学学位论文提交日期２０１５年４月Ｉ广州中医药大学学位论文原创性声明：立进行研究工作本人郑重声明所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独所取得的成果。

2、除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名＿＾曰期：年ｒ月２４曰＿关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位

3、论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名论文导师签名Ｌ．Ｍ，日期：年ｒ月２４日ｊ摘要目的：观察昆明山海棠配伍益母草（昆母）不同提取物对人类风湿关节炎成纤维样滑膜－－细胞（ＲＡＨＦＬＳ）增殖的抑制作用，了解其对ＲＡＨＦＬＳ的细胞周期、细胞调亡及血管ｃ－－内皮生长因子（ＶＥＧＦ）ｍＲＮＡ表达水平的影响，从ｃｙｌｉｎＤ１、ｂｃｌ２、ｂａｘ及ｃａｓｐａｓｅ３基因水平探讨其作用于细胞周期及细胞凋亡的可能机制。同时观察昆母对丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫｓ）信号通路蛋白磷酸化的影响，探讨其可能的作用机制。

4、方法：３－５ＲＡ－ＨＦＬＳ利用代为研究对象，分别给予昆母乙酸乙酯提取物、昆母氯仿提取物ｈ－、昆母石油醚提取物及昆母正丁醇提取物处理２４ｈ、４８ｈ及７２ＣＣＫ８检测各提，以Ａ－ＨＦＬＳ的生长抑制率取物对Ｒ，流式细胞仪检测２４ｈ各组的细胞周期及凋亡率；昆母４ｈＰＣＲＣ－乙酸乙酷提取物及氯仿提取物处理２，利用ｑ检测ｙｃｌｉｎＤ１、ＶＥＧＦ、ｂｃｌ２．－ｂａｘ及ｃａｓａｓｅ３表达水平ｓｔｅｒｎｂｏｌｔＥＲＫ、ＥＲＫ、ＪＮＫ、ｐＪＮＫ、ｐ，应用ｗｅ检测各组ｐＰ３８及ｐＰ３８蛋白水平。结果：－１．昆母各提取物对ＲＡＨＦＬ

5、Ｓ增殖的抑制作用（１）：２４ｈ昆母乙酸乙酯提取物与零加药组比较，高剂量组能抑制的细胞增殖ＣＫＯ．０５），而ＭＴＸ组及所有提取物组均可抑制４８ｈ及７２ｈ的增殖（均代０．０１）。低剂量组４８ｈ的细胞增殖与组相当（／Ｍ）．０５），而中、高剂量组则比ＭＴＸ组更强（均Ｋ０．０１）。与ＭＴＸ组比７２ｈ较，低剂量组的抑制作用偏弱，而中、高剂量组则更强（均ＲＯ．０１）。２２４ｈＲＡ－ＨＦＬＳ（）昆母氯仿提取物：与零加药组比较，各组均不能抑制增殖，而．０５）４８ｈ及７２ｈ各组均能显著抑制细胞增殖（均Ｋ０．０１。高剂量组抑制率稍高（ｍ

6、；）与ＭＴＸ组比较８ｈ．０，低剂量组４的抑制作用相当（／＾０．０５），７２ｈ偏弱（代０１），而中高剂量组４８ｈ及７２ｈ的抑制作用则更强０．０１）。（均Ｋ－（３）昆母石油醚提取物：与零加药组比较，２４ｈ各组均不能抑制ＲＡＨＦＬＳ增殖，而高剂量组抑制率稍高（／＾Ｏ．０５）；４８ｈ及７２ｈ各组均能显著抑制细胞增殖（均Ｋ０．０１）。．与ＭＴＸ组比较，低剂量组４８ｈ的抑制作用相当（／＾０．０５），７２ｈ偏弱（Ｋ００１），而中高剂量组４８ｈ及７２ｈ的抑制作用则更强（均八０．０１）。－（４）昆母正丁醇提取物：与零加药组比较，２４ｈ各组均不能

7、抑制ＲＡＨＦＬＳ增殖，而高剂量组抑制率稍高（／＾０．０５〉；４８ｈ及７２ｈ各组均能显著抑制细胞增殖（均代０．０１）．与ＭＴＸ组比较，低剂量组４８ｈ６＾抑制作用相当（／＾０．０５），低剂量组７２ｈ的抑制作用偏低（代０．０５）４８ｈ及７２ｈ的（．０１），而中高剂量组抑制作用则更强均代０。５ＲＡ－ＨＦＬＳ的抑制作用（）相同浓度的昆母各提取物对，时间越长，抑制作用越Ｉ龜强，抑制率越高同作用时间点，药物浓度越高，对成纤维样滑膜细胞的抑制作用；相越强，抑制率越高。昆母各提取物对成纤维样滑膜细胞增殖的抑制作用，呈时间和剂量依赖性。

8、２－．昆母提取物对ＲＡＨＦＬＳ细胞周期的影响２４ｈＧ１期及