对神经嵴干细胞潜在的成牙特性的研究

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1、暨南大学硕士学位论文题名（中英对照）：对神经嵴干细胞潜在的成牙特性的研究ResearchonthePotentialCharacteristicsofToothFormationinNeuralCrestStemCells作者姓名：刘晓指导教师姓名及学位、职称：朴正根副教授学科、专业名称：口腔医学硕士学位类型：专业学位论文提交日期：2015年4月20日论文答辩日期：2015年5月19日答辩委员会主席：吴补领教授论文评阅人：章锦才韦曦学位授予单位和日期：暨南大学2015年6月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成

2、果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论

3、文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编：中文摘要目的：近年来，牙齿的发育以及干细胞理论的牙齿再生技术成为人们研究的热点，而神经嵴干细胞（NCSCs）是一类多能的干细胞胚胎的细胞群，有助于各种颅面结构包括牙齿的形成，对于干细胞生物学和再生医学是一项重要的发展。通过动物实验，观察神经嵴干细胞的潜在成牙特性，为组织工程化牙齿的体内构建探寻新的再生资源与环境。方法：选择健康成年ICR孕鼠1-3只，体重约20g～25g，怀孕时间8.5d。在体视显微镜下从该孕鼠的胚

4、胎中分离出第4-6体节，使所取颅神经管中迁移出神经嵴干细胞，对细胞进行培养与传代。用免疫荧光法对所取细胞进行组织学鉴定，从而为观察神经嵴干细胞的潜在成牙特性提供理论依据。结果：1.实验过程中标本的形态学观察：在体视显微镜下观察到ED8.5孕鼠子宫和胚胎。成功截取胚胎第4-6神经节，并分离出颅神经管结构。证明获取的小鼠颅神经管正常可用。2.神经嵴干细胞的显微镜下观察：培养细胞到第2天时，在显微镜下可见神经嵴干细胞从颅神经管边缘迁移出来，围绕颅神经管生长，细胞形态为梭状形，胞核中等，胞质丰富。同时还观察了培养细胞到第4天，以及传代至第2代培养到第2天时的形

5、态。证明神经嵴干细胞的培养与传代均正常。3.免疫荧光实验的结果：将培养的第3代神经嵴干细胞进行免疫荧光鉴定，荧光显微镜显示结果为：特异性抗体P75，HNK-1，AP2α为阳性；分化抗体PAX6，SOX2为阴性。证明神经嵴干细胞的均一稳定状态。4.体外诱导成牙预实验的结果：原位杂交技术，免疫荧光方法检测成牙潜能相关基因PAX9，FGF10，BMP4等的表达。采用基因插入GFP使细胞定位，显示神经嵴干细胞紧密围绕上皮组织生长，证明其特性与牙源性间充质细胞相似。I结论：1.建立了稳定的神经嵴干细胞分离方法，采用无血清培养基可传代培养。2.神经嵴干细胞在形态、

6、基因表达、特异性蛋白标记的检测等方面均获得稳定的表达结果。关键词：组织工程；颅神经管；神经嵴干细胞；牙齿再生IIABSTRACTObjectiveInrecentyears,thedevelopmentoftheteeth,andstemcelltheoryoftoothregenerationtechnologybecometheresearchhotspot.Neuralcreststemcells(NCSCs)areamultipotentembryoniccellpopulationthatcontributestotheformationof

7、variouscraniofacialstructuresincludingteeth,itisanimportantdevelopmentinstemcellbiologyandregenerativemedicine.Throughtheexperimentsonanimals,Thepresentstudywasaimedtoobservethepotentialcontributionofneuralcreststemcellstotoothformation.Theresultswillprovideexperimentaldataforth

8、enewrenewableresourcesandtheenvironmentfortissu