家蚕tgf-β家族成员dpp和daw基因的功能研究

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1、系nSOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文--•....:.；：….：.............:V,-‘...件.;:r““r.•”•.....：,：-,：.“-”n论文题目基因的功能研究‘•••.说.研究生姓名指导教师姓名贡成良专业名称生物化学与分子生物学研j究方向信号通路及其功能论文提交日期2015年4月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文

2、的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：_n4日期：>o/.r《苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进

3、行检索。涉密论文口本学位论文属在年—月解密后适用本规定。非涉密论文qZ论文作者签名：；x.1^日期：IK.U..10导师签名日期：丨、上」。家蚕TGF-β家族成员dpp和daw基因的功能研究中文摘要中文摘要转化生长因子β（TGF-β）信号通路是细胞内重要的信号转导途径，生物进化的过程中十分保守。在人、小鼠、果蝇等研究中表明TGF-β蛋白是一种多功能的细胞间信号蛋白，在细胞增殖、识别、凋亡、专一性分化及细胞外基质合成等方面发挥重要作用，具有多种生物学效应。虽然在果蝇和哺乳动物中TGF-β信号通路研究的比较深入，但是，家蚕作为鳞翅目中一种典型的模式经济昆虫，关于TGF-β

4、信号通路的研究还未见报道。本研究在成功克隆家蚕TGF-β信号通路上两个关键基因Bmdpp和Bmdaw的基础上，分析了Bmdpp和Bmdaw基因的表达模式及其蛋白在家蚕BmN细胞中的亚细胞定位；研究了不同病原微生物感染家蚕后对Bmdpp和BmdawmRNA表达水平的影响；在细胞水平探讨了调节Bmdpp和Bmdaw表达水平对家蚕核型多角体病毒（BmNPV）和质型多角体病毒（BmCPV）增殖的影响；探究了TGF-β信号通路与Toll、Imd、JAK/STAT和RNAi通路的相关性；通过Co-IP筛选了BmN细胞中可能与Bmdpp和Bmdaw互作蛋白，并利用质谱技术对蛋白条带

5、进行了鉴定。期望通过探讨家蚕TGF-β信号通路中Bmdpp和Bmdaw基因的功能，明确TGF-β信号通路在家蚕先天免疫途径中的作用，其研究结果可为家蚕抗病性研究提供新的思路。本研究取得的主要结果如下：1.家蚕TGF-β信号通路Bmdpp和Bmdaw基因的克隆及序列分析为了研究家蚕TGF-β信号通路的功能，我们参考果蝇的dpp（序列号：NM_057963.5）和daw（序列号：NM_001273038.1）序列，在家蚕数据库(http://www.silkdb.org/silkdb/)中比对获得了家蚕Bmdpp和Bmdaw基因序列。根据现有的EST序列设计了基因特异性引

6、物进行RT-PCR克隆，测序结果显示，Bmdpp的ORF为1110bp，编码370aa；Bmdaw的ORF为1086bp，编码362aa。蛋白质二级结构分析显示，Bmdpp蛋白的二级结构主要为无规卷曲和α螺旋；Bmdaw蛋白的二级结构主要为无规卷曲。Bmdpp和Bmdaw均含有TGF-β蛋白结构域，推测其具有TGF-β蛋白活性，且与果蝇dpp和daw同源性较高。I中文摘要家蚕TGF-β家族成员dpp和daw基因的功能研究2.家蚕Bmdpp和Bmdaw基因表达谱分析为了探讨家蚕Bmdpp和Bmdaw基因的表达规律，通过实时定量PCR（Real-TimePCR）分析了Bm

7、dpp和Bmdaw基因在家蚕五龄第3天不同组织(精巢、卵巢、脂肪体、头、丝腺、马氏管、血细胞、中肠和气管丛)的表达水平。结果显示，Bmdpp和Bmdaw基因在血细胞中表达量最高，其它组织中表达量均较低。3.家蚕Bmdpp和Bmdaw蛋白多克隆抗体制备和亚细胞定位分析为了分析Bmdpp和Bmdaw细胞定位特征，将Bmdpp和Bmdaw基因分别克隆进原核表达载体pET-28a(+)，在E.coli中诱导表达，并利用重组蛋白免疫小鼠，制备了抗Bmdpp和Bmdaw的多克隆抗体。Westernblotting实验证实制备多克隆抗体具特异性。细胞定位结果显示，