土壤放线菌ⅲ-172次级代谢产物的分离、纯化及结构鉴定

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1、学校代码：10270分类号：Q93学号：122200890上冷大營硕士学位论文土壌放线菌III-172次级代谢产物的分离、纯化及结构鉴定学院：生命与环境科学学院专业：微生物学研究方向：微生物药物学研究生姓名-盛婷指导教师：陶明教授完成日期：零五年四月论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中做了明确的声明并表示了谢意。作者签名：汉裔円期：>1+6^论文使用授权声明

2、本人完全了解上海师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：各f气导师签名曰期士咏_本论文经答辩委员会全体委员审查，确认符合上海师范大学硕（博）士学位论文质量要求。答辩委员会签名:主席（工作单位、职称）：委员：导师：ShanghaiNormalUniversityDissertationforMasterDegreeTitleIsolation,Purifica

3、tionandIdentificationofSecondaryMetabolitesProducedbySoilActinomyceteⅢ-172FacultyLifeandEnvironmentScienceCollegeMajorMicrobiologyDirectionMicrobialPharmacologyAuthorShengTingTutorProfessorTaoLimingDateApril,2015上海师范大学硕士论文摘要摘要从上海南方农药研究中心得到一批长川霉素产生菌的诱变菌株，对它们分别进行发酵

4、培养，对发酵液进行一系列处理，然后测试各部分的生物活性，以抑菌活性强弱和菌株斜面生长情况作为筛选指标，最终筛选到了一株土壤放线菌Ⅲ-172，其代谢产物对植物病原真菌具有较强的抑制作用。本文对土壤放线菌Ⅲ-172的抑菌活性组分进行了分离纯化及活性研究。在进行发酵之前，对某些培养条件简单做了一下优化，比如说确定发酵时间以及有机萃取相。经过活性比较，确定菌株的最佳发酵时间为7天，最佳的有机萃取溶剂是正丁醇。接着用优化的培养条件对土壤放线菌Ⅲ-172进行发酵培养，全程结合植物病原真菌的生物活性的跟踪测试，以长川霉素做为比对标准，

5、通过冷冻高速离心、有机溶剂分层萃取和浸取、硅胶柱层析、薄层层析、旋蒸浓缩、高效液相色谱分析与制备等一系列的分离纯化方法，逐渐对其发酵代谢产物中的活性组分进行分离纯化。在展开剂比例为CH2Cl2:CH3OH=10:1，Rf值为0.43左右，薄层层析板上出现了活性条带5。对条带5进行高效液相色谱分析，在流动相是10%的甲醇，保留时间为24-26min之间时，分离得到了一个独立的活性峰。接着就进行高效液相色谱制备，把制备出来的抑菌的活性化合物命名为Ⅲ-172-Ⅰ-a。经高效液相色谱分析仪测试，化合物的纯度为92.9%。紧接着对

6、其进113行质谱与核磁共振分析。通过UV、ESI-MS、H-NMR、C-NMR等一系列的谱图对其进行结构鉴定，解析出化合物的分子量为138.1，分子式为C8H10O2。查找相关资料，了解了该化合物的一些基本性质，比如熔点为85℃，沸点为310℃，在水，乙醇，乙醚，丙酮等物质中都可以溶解。最后还通过生物活性测定，确定了其对病原指示菌Po的最低抑菌浓度MIC为31.25ppm。提取出来的化合物Ⅲ-172-Ⅰ-a对常见的病原指示菌Po有较强的抑制活性。测试了最低抑菌浓度MIC，这使得其以后能更经济地应用到农业生产中。关键词：土

7、壤放线菌筛选；分离纯化；结构鉴定；生物活性；最低抑菌浓度IAbstractShanghaiNormalUniversityMasterofPhilosophyAbstractAbatchofmutantstrainsproducingascomycinprovidedbyShanghaiPesticideResearchSouthCenter,werefermentedandfosteredseparately,thenaseriesofproceduresweredealtwiththem.Duringtheproce

8、ss,alotofbiologicalactivitytestsweredonetothem,theirantimicrobialactivitiesandthegrowthconditionofstrainontheslantwereconfirmedastwoscreeningindicators,finally