放线菌fl2菌种鉴定与其活性代谢产物分离纯化研究

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1、沈阳药科人学硕L．学位论文摘要本论文以从土壤中分离得到的放线菌株FL．2为研究对象。首先对其进行纯化，通过自然选育的方法，得到抑菌活性相对较强的菌落形态，并对其斜面培养基进行筛选，获得较优斜面培养基为：玉米面59，麦芽糖59，酵母膏49，琼脂209，水1000ml，pH7．O～7．2。用此培养基进行传代培养表明，该菌株传代稳定性良好。采用经典鉴定方法和分子分类方法对菌种FL一2进行了鉴定，结果表明，放线菌FL一2属于链霉菌属，并且与娄彻氏链霉菌(Streptomycesrochei)具有99％的同源性，FL一2菌株的形态及培养特征与Streptomycesrochei基本一致但略有不同，

2、生理生化测定也有差异，所以确定菌株FL．2是链霉菌属Streptomycesrochei的一个变种。本文还对菌株的发酵条件进行了优化，通过正交试验设计，确定了优化的发酵培养基配方为：玉米粉509，MgS04O．59，KCl2．59，KH2P0439，Na2HP04lg，水1000ml。优化发酵条件组合为：发酵时间6d，初始pH值7．0，装液量50ml，发酵温度28℃，摇床转速220r／min。对菌株FL一2发酵产物的热稳定性和酸碱稳定性进行了测定。结果表明，pH值为6．4时，该菌株发酵产物在60。C水浴温度下稳定性较好，处理一小时后发现对葱菌核病菌的抑制率只下降了11．13％。100"C

3、水浴温度下活性随时间延长变化较大，处理一小时后发现对葱菌核病菌的抑制率下降了58．31％。同时研究结果显示，产物在中性、偏碱条件下稳定性较好，在强酸条件下活性降低较快。常温下储藏二个月表明该菌株产物稳定性较高。发酵液经预处理、溶媒萃取等步骤后，采用薄层层析色谱对活性物质进行分离制备。收集活性组分，利用高效液相色谱对分离产品进行进一步的分析和纯化，色谱条件为：流动相0．02mol／L磷酸二氢钾：乙腈(60：40)，流速lml／min，检测波长207nm，活性成分实现良好的分离，高效液相制备出的单组分可以满足光谱分析等进一步研究的需要。经ESI—MS得出此活性纯品的分子量为463。关键词：放

4、线菌；分类鉴定；发酵条件；分离纯化；沈阳药科大学硕士学位论文AbstractThestrainFL一2whichwaslsolatedfromthesoilwasmainlystudiedinthisthesis．ThestrainWasfirstlypurifiedbyselectionofspontaneousmutation，andthen，theselectionoftheslantcultureofstrainFL一2showedthatthemostsuitablecomponentswerecornmeal59，maltose59，yeastextract49，agar20

5、9，water1000ml，pH7．O～7．2．Thestrainculturedinthismediumwasabundant，quicksporeandshortcycle，SOthismediumwasthebesttOconservethestrains．ThecontinuouslypassagecultureinwhichtheslantcultureWasusedshowedthattheproductofthestrainwasstable．The16SrDNAsequenceresultsshowedthatthehomologybetweenstrainFL-2and

6、Streptomycesrocheiis99％．However,thephysiologicalandbiochemicalcharacteristicsdemonstratedthatthestrainisdifferentfromthoseofthemodelstrain．SOstrainFL一2iSproposedasanewvarietyofStreptomycesrochei．Thefermentationconditionswereobtainedthroughquadrateexperiment，Theoptimalcombinationofmediumwascornmea

7、l509，KCl2．59，KH2P0439，Na2HP04lg，water1000m1．Theoptimalfermentationparameterswereasfollows：culturetemperature(28。C)，initialpH(7．O)，50mlliquidmediumin250mlflake，220r／minfor6d．StabilitytestoffermentationproductsofFL-2hadb