放线菌i03a-02842筛选、活性产物分离纯化以及sansanmycins次要组分的研究

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1、中文摘要本论文主要包括两方面的工作：一是抗结核微生物103A-02842筛选和发酵产物的分离纯化；二是抗结核抗生素SansanmycinD、E组分的分离纯化、结构鉴定。抗结核微生物103A-02842的筛选和发酵产物的分离纯化：细菌中DNA拓扑异构酶II有A、B两个亚基。A亚基是喹诺酮类药物的作用靶点。B亚基是新型抗结核药物的筛选靶点，以此亚基为靶点建立的筛选模型，可以避免筛选到的活性成分与喹诺酮类药物产生交叉耐药。肖春玲教授以B亚基为靶点筛选到103A系列菌株。我们通过大孔树脂4006柱层析、8个溶媒系统的纸层析、抗菌活性的初步测

2、定，从该系列中的28个备选菌株中挑选到产生活性物质的菌株103A-02842。发酵液处理后经大孔树脂4006、强酸性阳离子树脂Ix3，得到Ix3树脂的流出液与洗脱液。流出液(主要含脂溶性组分)经中性乙酸乙酯萃取，薄层层析，得到两个活性化合物A、B，经LC--MS(高压液相一质谱联用)测得分子量为612、626。由于含量较少，结构鉴定有待于进一步的研究。洗脱液中主要含水溶性组分，对草分枝杆菌、革兰氏阳性细菌均有活性，采用SP-Sephadex-C．25葡聚糖凝胶柱层析、ODS柱柱层析对其中活性成分的分离进行了初步探索。由于洗脱液中活性

3、成分的含量很低，所以未能得到足量的样品以供分析鉴定。抗结核抗生素Sansanmycins次要组分的分离纯化、结构鉴定：通过大孔吸附树脂柱层析、ODS柱柱层析、制各型HPLC等方法得到两个次要组分SansanmycinD和E。通过质谱和核磁共振波谱，鉴定出SansanmycinD的结构，证明其为已知化合物，与MureidomycinA结构相同。通过ESI--MS、ESI--MS／MS以及其理化性质和紫外光谱，对SansanmucinE的结构进行了初步推测，其最终结构的确定还有待于进一步进行。两个组分对绿脓杆菌11都有一定的活性，但对草

4、分枝杆菌的抗性较弱。11IABSll蝴Thecurrentworkincludedtwoparts．Oneisthescreeningofanti-tuberculosismicroorganism103A一02842andtheisolationandpurificationofitsfermentationproducts．Theotheristheisolation，purificationandsu-ucturalidentificationofSansanmycinD．ETheDNAtopoisomeraseⅡofbact

5、eriahadtwosubunits：AandB．SubunitAisthetargetofquinolonedmgs．SubunitBisanewkindofscreeningtargetforanti—TBdrugs．ThescreeningmodeltargetingsubunitBpermittedobtainingactivecompoundswithoutcrossresistancewithquinolonedrugs．ProfessorXiaohadfoundaseriesof103Amicroorganismwit

6、hthescreeningmode．Thestrain103A-02842wereobtainedfromtheseriesof103Amicroorganismbymeansofmacroporousadsorptionresinchromatography，paperchromatographyanddeterminationofantibacterialactivity．Fermentationbrothwasfilteredandappliedsequentiallyonthecolumnsofmacroporousadso

7、rptionresinandcationexchangeresin．Theeffluentandeluantwe∞obtainedfromthecationexchangeresincolumn．Bymeansofextractionwithethylacetate(PH=7)andpreparativethinlayerchromatography,twoactivecompounds，AandB，wereobtainedfromtheeffluent．TheanalysisofLC—MSshowedthemolecularwei

8、ghtofthecompoundA(612)andB(624)．Buttheirstructureswerenotidentifiedduetothelittlecontent．Theeluentincludedwater-solub