含小鼠fcγrⅱb基因慢病毒载体对mrllpr sle小鼠的作用研究

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1、分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：201200012宁夏医科大学硕士研究生学位论文含小鼠FcγRIIb基因慢病毒载体对MRL/lprSLE小鼠的作用研究StudyofcontainingwithFcgammaRIIbgenelentivirusvectorsinMRL/LprSLEmice学位申请人：郑修军王琦教授指导教师：杨志伟教授合作指导教师：申请学位门类级别：医学病原生物学专业名称：感染免疫研究方向：所在学院：基础医学院二〇一五年三月论文完成日期：宁夏医科大学研究生院INingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster

2、’sDegreeStudyofcontainingwithFcgammaRIIbgenelentivirusvectorsinMRL/LprSLEmiceStudent’sName:ZhengXiujunSupervisor：Prof.WangQiSubjectCategory:MedicalScienceMajor:PathogenicBiologySpecialty:InfectionandImmunitySchool:SchoolofBasicMedicalScienceCompletionDate:Mar.2015IIg

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7、乡)^\>is外^；I^\含小鼠FcγRIIb基因慢病毒载体对MRL/lprSLE小鼠的作用研究摘要目的包装含小鼠FcγRⅡB慢病毒表达载体，观察其在小鼠B细胞表面的表达并研究其抑制性受体对MRL/lprSLE小鼠的作用研究。方法将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒调节质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞，分别包装表达病毒和调节病毒，分别测定表达病毒和调节病毒感染滴度。将MRL/lprSLE小鼠预防动物（周龄

8、8周左右）40只随机分成病毒液100ul组、病毒液200ul组、预防空病毒组（不含FcγRIIb基因）、预防对照组（生理盐水组）四组，每组10只，再将模型动物（周龄16周左右）组40只随机分成病毒100ul组、200ul组、治疗空病毒组（不含FcγRIIb基因）和治疗对照组（生理盐水组），每组10只。通过尾静脉注射将病毒液转导到MRL/lprSLE小鼠体内，连续注射四周，每周一次。注射完成后，观察二周后提尾反射法收集小鼠尿液检测小鼠尿蛋白，眼眶內眦静脉取血约500µL后检测小鼠抗核抗体和抗双链ＤＮＡ含量，取血完成后处死小鼠，取各组小鼠新鲜脾脏组织进行研磨、淋巴细胞分离后再磁珠分选检测Ｂ细胞上

9、FcγRIIb基因的ｍＲＮＡ和蛋白的表达并做肾脏、淋巴结、肝脏的病理切片。同时各组的蛋白采用Westernblot法和磷酸化Westernblot，观察B细胞通路上的Btk、Ship1、Pyn总蛋白和磷酸化蛋白的表达来研究其可能的机制。数据用SPSS16.0软件进行统计学处理，组间比较采用t检验分析，p<0.05为差异具有统计学意义。图表利用GraphPadPrism5.0软件绘制。结果61．表达病毒和调节病毒滴度均达10TU/mL。2．MRL/lprSLEFcγRⅡBmRNA和蛋白表达水平检测结果：预防和治疗空病毒组与对照组相比无意义，病毒组（含100µL和200µL组）与空病毒组相比Fc

10、γRⅡBmRNA和蛋白增加。3.MRL/lprSLE小鼠尿蛋白、抗双链DNA抗体含量检测结果：预防和治疗空病毒组IV与对照组相比无意义，病毒组（含100µL和200µL组）与空病毒组相比尿蛋白、抗双链DNA含量减少。4．4.1对照组B细胞上的Btk、Lyn与空病毒组相比无意义，预防病毒组中的Btk（含100µL和200µL组）与空病毒组相比蛋白含量明显减少，p<0.01，有统计学意义。预防200µL组Btk总