半夏块茎诱导条件优化及其生物碱含量研究

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1、半夏块茎诱导条件优化及其生物碱含量研究摘要：半夏为天南星科半夏属多年生草本植物，以块茎入药。半夏的人工栽培繁殖力较低，再加上半夏常常会因染病毒而引起其品种质量的退化，致使半夏种源常常不能供应生产的需求。目前，由于对半夏块茎次生代谢方面研究的不足，其块茎生长的人工调控技术发展得十分缓慢，致使半夏生产的发展受到了严重的制约。因此，很有必要进行半夏块茎的相关研究。经过本研究，得出了以下研究结果：(1)经过进行半夏组织离体培养及植株再生体系的建立这一部分的试验，得-1-1出：用MS+6-BA1.0mg•L+IAA0.5mg•L培养基可以快速扩繁半夏的外植体。半夏外植体用此培养基培养，很快便能在叶柄

2、两端形成膨大的块茎，这对于快速获得半夏块茎极有意义。半夏块茎形成之后，块茎扩增繁殖，并很快开始分化形成叶子。再剪去半夏新长出的叶子，当植株再生长的时候，叶子长得更快更多，根系也得以快速生长，此方法能够让半夏组培苗在短时间内长出叶子和根系。本试验后续进行的研究要通过半夏叶柄诱导形成小块茎，而此时培养的半夏组培苗能够提供足够的半夏叶柄。因此，进行半夏植株再生体系的优化研究尤为重要。(2)经过进行半夏试管小块茎的诱导这一部分的试验，得出：用半夏叶柄倒置培养的方式可获得遗传稳定的未分化状态的半夏小块茎。随着时间的积累，半夏试管小块茎逐渐形成，培养25d的效果最好，培养30d时，半夏试管小块茎开始分

3、化，长出白色的根，此时的小块茎已不适合作为悬浮培养材料，因此，培养25d的半夏小块茎是最佳的试验材料。在MS培养基中，半夏叶柄倒置培养，能够长出试管小块茎，同时叶柄保持绿色，并增粗。而不进行倒置培养的半夏叶柄不形成小块茎，而且叶柄在培养的同时也会逐渐枯萎。(3)经过进行水杨酸刺激下半夏试管小块茎悬浮培养体系的建立这一部分的试验，得出：未经水杨酸处理的对照组半夏悬浮块茎的鲜重、干重随着时间的增加而增加，这说明半夏悬浮块茎的生物量是不断积累的。处理组在0~10d时，悬浮培养的半夏块茎的鲜重、干重增长量均较小，推测可能是外源添加的水杨酸导致半夏试管块茎不能很好地适应环境的变化，造成半夏悬浮培养块

4、茎生长抑制，导致半夏试管块茎的鲜重、干重增长缓慢。由此可知：外源添加的水杨酸对半夏悬浮块茎的生长有一定的影响。(4)经过进行高效液相色谱法测定水杨酸刺激下半夏生物碱的含量这一部分的试验，得出：在流动相的选择中，甲醇∶超纯水=5∶95是流动相配比中最佳的选择。在检测波长的选择中，254nm的波长为其波长的最佳选择。通过使I用Agilent1200高效液相色谱仪测定水杨酸刺激下半夏样品中鸟苷和肌苷的含-1量，得出：半夏块茎在培养10d，在水杨酸浓度为50μmol•L时，鸟苷的含量-1-1达到最大值，为1.353mg•g。半夏小块茎培养30d，在水杨酸浓度为200μmol•L-1时，肌苷的含量达

5、到最大值，为0.149mg•g。关键词：半夏；试管块茎；水杨酸；HPLCIITheOptimizationofInducingConditionsandStudiesontheContentsofAlkaloidsofPinelliaternataTuberAbstract：Pinelliaternata(Thunberg)TenoreexBreitenbach,whichbelongstoAraceae,isaperennialherbaceousplant.ThemedicinalpartofP.ternataisitstuber.ThefertilityofcultivatedP.t

6、ernatawaslow,andthequalityofP.ternataoftendegeneratedduetovirusinfected,resultingP.ternataprovenancewasoftenunabletomeetthedemand.Atpresent,duetothelackofP.ternatatubermolecularmechanismofsecondarymetabolites,thedevelopmentofitstubersgrownartificialregulationtechnologywasveryslowly,resultinginthed

7、evelopmentofP.ternataproductionhasbeenseverelyconstrained.Therefore,itwasnecessarytocarryoutrelatedresearchofP.ternate.Throughthisstudy,weobtainedthefollowingresults:(1)AftertheexperimentofP.ternatatissueculturea