动物性食品中玉米赤霉醇elisa快速检测方法的研究

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1、分类号UDC密级编号专业硕士学位论文动物性食品中玉米赤霉醇ELISA快速检测方法的研究Thestudyonenzyme-linkedimmune-sorbentassay(ELISA)methodforzeranolresiduesinanimalfoodproducts学位申请人：邓歌指导教师：邓瑞广研究员侯玉泽教授合作教师：胡骁飞副研究员专业领域：食品工程学位类别：工程硕士2015年06月独创性声明本人声明，所呈交的论文是我个人在导师指导下完成的研究工作及取得的研究成果。据我所知，文中除了特别加以标注和致谢的地方外，

2、不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河南科技大学或其它教育机构的其他学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：摘要摘要近年来，真菌毒素对食品的污染越来越严重，其中因玉米赤霉醇(ZER)所造成的污染已不容忽视。玉米赤霉醇及其代谢产物具有一定的雌激素作用，它随食物链进入机体后，会造成机体生长发育障碍，对机体第二性征产生影响。我国农业部早在2002年就明确禁止玉米赤霉醇作为增重剂用于畜禽养殖。目前，用于食品及饲料中ZER的检测方

3、法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法和免疫分析技术。薄层色谱法只能用于定性分析；高效液相色谱法的前处理过程复杂，需要专业人员操作，应用大量的有毒有机溶剂，使其应用受到一定的限制。而ELISA免疫分析技术具有快速、灵敏、简便、特异等优点，正好可以弥补上述方法的不足，已被成功运用于食品和饲料中真菌毒素的快速检测。1、玉米赤霉醇人工抗原的合成及多抗血清的制备针对ZER第十六位上的羟基进行改造，设计并合成半抗原ZER-16-羧丙基丁醚。分别采用混合酸酐法和碳二亚胺(EDC)法将改造后的半抗原与载体蛋白BSA和OVA偶联，制备出人工

4、免疫抗原ZER-BSA和人工检测抗原ZER-OVA。经SDS-PAGE电泳鉴定，偶联蛋白在凝胶上的迁移距离比载体蛋白小，故偶联成功。之后免疫小鼠并成功制备出效价达1:2.56×104、IC50为15.77ng/mL的鼠源多抗血清。2、玉米赤霉醇单克隆抗体的制备及其特性鉴定成功获得高效ZER多抗血清后，采用单克隆抗体技术和细胞融合技术将有效小鼠的脾细胞与SP/20骨髓瘤细胞进行融合，多次亚克隆后筛选出了三株能够稳定分泌ZERmAb的杂交瘤细胞株，分别为6B2E6、6B2E11和12B10A7，其细胞上清效价可达1:2.56

5、×104、1:5.12×104和1:2.56×104。将敏感性最好的12B10A7细胞株注射到处理过的小鼠腹腔内，收集到的腹水效价为1:6.4×105。所得单抗经鉴定为IgG111型，亲和常数Ka为4.7×10L/mol，回归方程为y=-0.3796x+0.7746，相关系数R2=0.9885，IC50=0.529ng/mL。ZERmAb与黄曲霉毒素B1（AFB1）、伏马菌素B1（FB1）等非同类毒素的交叉反应率低，均小于0.5%。该细胞株不论是体外传代还是冻存复苏后都能稳定地分泌抗体。3、ZER间接竞争ELISA检测分

6、析法的建立及在动物性食品中ZER残留检测的应用通过反复的ELISA检测试验，确定了抗原最佳包被浓度为1:2000倍稀释，抗体最佳工作浓度在1:10000倍稀释，建立了ZER间接竞争ELISA检测方法，用此方法对动物性食品中ZER残留进行检测，回归方程为y=-0.3582x+0.5949，I摘要相关系数R2=0.9925，IC50=0.184ng/mL。回收率在85%以上，变异系数小于10%，试验结果表明本试验建立的ZER间接竞争ELISA检测分析法灵敏性强，准确率高，能够有效地检测食品中ZER的残留。关键词：ZER；半抗

7、原；人工抗原；ELISA；单克隆抗体论文类型：研究类选题来源：1.公益性行业（农业）科研专项：畜产品中兽药和违禁药物残留的快速检测技术研发与示范201003008-092.十二五国家科技支撑计划:畜禽产品安全生产监控和检测技术研究与示范2014BAD13B053.河南省农业科学院优秀青年基金项目：基于噬菌体展示技术的霉菌毒素安全检测新技术研究2013YQ29IIABSTRACTABSTRACTRecently,fungaltoxincontaminationhasbecomeoneofthemaincontaminati

8、onsinthefoodcontamination,especiallythecontaminationscausedbyzeranol(ZER)whichcannotbeneglected.Zeranolanditsmetaboliteproducthaveacertainfunctionofestrogens,o