zeb2在肝癌血管生成拟态形成中的作用研究

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1、分类号：R361学校代码：10062密级：学号：2012601013博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：ZEB2在肝癌血管生成拟态形成中的作用研究TITLETheRoleofZEB2inHepatocellularCarcinoma’sVasculogenicMimicryFormation一级学科：基础医学二级学科：病理学与病理生理学论文作者：杨志宏指导教师：孙保存教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R361学校代码：10062密级：学号：2012601013学位类别：科学学位√专业学位学

2、科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：ZEB2在肝癌血管生成拟态形成中的作用研究TITLETheRoleofZEB2inHepatocellularCarcinoma’sVasculogenicMimicryFormation一级学科：基础医学二级学科：病理学与病理生理学论文作者：杨志宏指导教师：孙保存教授导师组成员：赵秀兰主任技师刘铁菊副教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用

3、的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论

4、文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要研究背景和目的肝细胞肝癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是一种常见原发性恶性肿瘤,具有高转移率和高复发率。尽管近年来肝癌的治疗手段有了明显进展,但治疗效果仍不尽如人意，患者的生存质量、存活时间都没有显著改善。不同于传统的肿瘤血供模式，血管生成拟态(vasculogenicmimicry,VM)是一种独特的肿瘤微循环模式，并且往往关联着肿瘤的侵袭、转移以及不良预后。在VM形成的分子机制中，有较多的观点支持上皮-间充质转化（epithelial-mesen

5、chymaltransition，EMT）参与其中，但两者之间的调控机制仍不明确。本研究旨在通过分析EMT转录因子ZEB2在人肝癌中表达和预后价值，初步揭示ZEB2与VM的关系；通过研究细胞因子TGF-β1对体外肝癌细胞的诱导作用，进一步证实EMT参与肝癌VM形成；通过研究ZEB2对细胞功能的影响，探讨ZEB2调控的EMT在肝癌血管生成拟态形成中的可能作用机制。方法1）通过特殊染色方法—CD31/PAS双重染色方法标记肝癌组织中VM管道结构。免疫组织化学染色检测人肝癌组织中ZEB2的表达并分析ZEB2与VM形成、临床病理参数的关系

6、以及预后价值。2）选取不能形成管道样结构的肝癌HepG2细胞系，用细胞因子TGF-β1诱导培养，观察诱导前后细胞形态和成管能力的变化。3）Westernblot检测TGF-β1诱导培养后的肝癌细胞EMT转录因子Twist1、Snail、Slug和ZEB2的表达情况；检测EMT相关分子E-cadherin,Vimentin及内皮相关分子VE-cadherin的表达情况。4）Westernblot检测四种肝癌细胞系HepG2,Bel7402,PLC和SMMC7221中ZEB2的表达情况。5）筛选出低表达和高表达ZEB2的肝癌细胞系，分

7、别上调和下调ZEB2的表达,并观察ZEB2高、低表达对细胞成管能力及内皮相关分子表达的影响。6）Westernblot和免疫荧光染色检测ZEB2高、低表达对肝癌细胞EMT相关分子E-cadherin、Vimentin表达的影响。7）细胞划痕和侵袭实验检测ZEB2高、低表达对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影I响。8）明胶酶谱检测ZEB2高、低表达对肝癌细胞MMP-2和MMP-9活性的影响。结果1）92例人肝癌组织样本中发现17例存在VM，其发生率为18%。免疫组化染色发现ZEB2细胞浆表达53例（57.6%），ZEB2核表达21例（22.

8、8%）。ZEB2核表达VM形成、临床分期和肝癌患者的复发/转移有关(P<0.05)。生存分析提示具有ZEB2细胞核表达或者VM阳性的肝癌患者总生存期均较短。多因素分析结果表明ZEB2是肝癌患者总生存期的独立预后因素(P<0.05)。2）TGF-β1