vegf基因修饰后人脂肪干细胞上清对成纤维细胞及内皮细胞的影响

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1、暨南大学硕士学位论文题名（中英对照）：VEGF基因修饰后人脂肪干细胞上清对成纤维细胞及内皮细胞的影响TheeffectofVEGFmodifiedadiposederivedstemcellsconditionedmediumonfibroblastsandendothelialcellsinvitro作者姓名：李江璇指导教师姓名及学位、职称：肖丽玲（硕士，副主任医师）学科、专业名称：整形外科学位类型：专业学位论文提交日期：论文答辩日期：答辩委员会主席：论文评阅人：学位授予单位和日期：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究

2、工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编

3、学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：暨南大学硕士学位论文摘要研究背景：慢性创面患者人数的增加已成为一个重要的社会和经济问题，人脂肪干细胞（HADSCs）可以分泌多种生长因子并可用于创面治疗，现我们试图通过慢病毒携带血管内皮生长因子（VEGF）基因转染于HADSCs，获得VEGF的稳定分泌。目的：为探索一种有效的创面治疗方法，我们使用慢病毒携带VEGF基因修饰HADSCs，检测其上清液中VEGF的表达，并用其上清液作用于创面愈合关键细胞，

4、观察其对人皮肤成纤维细胞（HDFs）及人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖、迁移的影响。材料及方法：1、通过胶原酶消化法从人脂肪中提取HADSCs，经流式细胞仪检测其表面标志物，并进行成脂、成骨、成软骨多向诱导；2、将携带VEGF基因的慢病毒转染于HADSCs，以GFP作为报告基因分析转染效率，并定时收集上清液，通过ELISA法检测上清中蛋白分泌情况。3、将不同组HADSCs-CM作用于HDFs及HUVECs，通过CCK-8法检测细胞增殖，划痕法检测细胞迁移能力。结果：1、经过0.1%的Ⅰ型胶原酶消化法可方便、有效地提取出HADSCs，经流式鉴定

5、显示CD90、CD29、CD44、CD105为（+），CD45、CD106为（-），并可成功多向诱导。2、通过GFP荧光可观察，发现VEGF可稳定转染于HADSCs，ELISA结果显示其VEGF及bFGF分泌提高并维持在较高水平。3、当完全培养基混合与VEGF-HADSCs-CM以1:2的比例混合时对成纤维细胞及内皮细胞的增殖及迁移有明显的促进作用。结论：HADSCs容易获取，含量丰富，是组织工程理想的种子细胞。慢病毒携带VEGF基因可成功转染于HADSCs，通过蛋白质相互作用使HADSCs-CM中的VEGF及bFGF表达明显提高，提取转染后VE

6、GF-CM作用于体外创面愈合相关的成纤维细胞及内皮细胞有明显促增殖、迁移能力，提示应用其治疗慢性创面的潜能。关键词：脂肪来源干细胞；创面愈合；基因转染；血管内皮生长因子；慢病毒I暨南大学硕士学位论文AbstractBackground:Withtheincreasingprevalenceofchronicwounds,ithasbecomeaserioussocialandeconomicproblem,humanadiposederivedstemcells(HADSCs)cansecreteavarietyofgrowthfactorsan

7、dcanbeusedforwoundhealing,wearetryingtothroughlentivirusvectorcarryingvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)genetransfectHADSCs,acquirethestablesecretionofVEGF.Objective:Toprovidenewmethodoftreatingwounds,weusinglentiviruscarryingVEGFgenemodifyHADSCs,observewhethertheVEGFandbF

8、GFareoverexpressionstably,detectingtheeffectsofHADSCs-CMonhumanderma