血管紧张素ii对成人脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化的影响

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1、血管紧张素II对成人脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化的影响【摘要】目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对成人脂肪间充质干细胞(ADMSCs)向心肌细胞方向分化的诱导作用，并与5氮杂胞苷（5aza）作比较.方法：自成人脂肪组织中分离培养ADMSCs，分别用AngⅡ（Ⅰ组）和5aza（Ⅱ组）诱导ADMSCs，同时设立对照组（Ⅲ组），光镜下观察细胞的生长情况及形态学变化，电镜下观察细胞的超微结构，免疫细胞化学方法检测心肌特异性肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ），MTT法检测细胞活性，流式细胞术分析细胞周期及凋亡.结果

2、：Ⅰ,Ⅱ组ADMSCs诱导后呈现类似心肌细胞的形态学特征，第28日Ⅰ,Ⅱ组均表达cTnⅠ，两组间诱导转化率无差别，其中Ⅰ组ADMSCs增殖迅速，较少凋亡细胞.结论：AngⅡ在促进ADMSCs增殖的同时诱导其向心肌细胞分化，优于传统的化学诱导剂5aza.【关键词】干细胞；脂肪组织；血管紧张素Ⅱ；5氮杂胞苷；心肌细胞；诱导分化　　【Abstract】AIM:TostudytheinductioneffectofangiotensinⅡ(AngⅡ)onthedifferentiationofadultad

3、iposederivedmesenchymalstemcells(ADMSCs)intomyocardialcells,andtopareitseffectadultadiposetissue.AngⅡ(GroupⅠ)and5aza(GroupⅡ)orphologicalchangesicroscope.Electronmicroscopemunocytochemicalmethodsetryilarmyocardialcellsinmorphologicalfeatures.Tination.ADM

4、SCsinGroupⅠhadhigherproliferationrateandlooteADMSCsproliferationbutalsoinducedifferentiationtothedirectionofmyocardialcells.Itseffectsisbetterthanthatoftraditionalchemicalinducer5aza.　　　　【Keycells;adiposetissue;angiotensinⅡ;5azacytidine;myocardialcells;

5、induceddifferentiation　　0引言　　近年有实验证明，血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）能够诱导人骨髓间充质干细胞（bonemarroesenchymalstemcells，BMMSCs）分化为心肌样细胞.而脂肪间充质干细胞(adiposederivedmesenchymalstemcells，ADMSCs)［1］以其独特的优点在再生医学及组织工程领域有着更为广阔的应用前景.ADMSCs是否也能够被AngⅡ诱导向心肌细胞方向分化，AngⅡ的诱导分化作用与传统的化学诱导

6、剂5氮杂胞苷（5azacytidine，5aza）有何不同？目前有关这方面的研究相对较少.本实验通过使用AngⅡ作为促分化物质，观察其对ADMSCs向心肌细胞分化的影响，并与5aza比较，以期优化ADMSCs的体外诱导分化条件.　　1材料和方法　　1.1材料高糖DMEM培养基，Ⅰ型胶原酶(Gibco)，胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)（杭州四季青），胰蛋白酶（Invitrogen），AngⅡ（AnaSpec），5aza,MTT（Sigma），鼠抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ（card

7、iactroponinⅠ,cTnⅠ）单克隆抗体（CHEMICON），SP免疫组化染色试剂盒，DAB显色试剂盒（北京中杉金桥），流式细胞仪（BECTONDICKINSON），酶标仪（芬兰雷勃），倒置相差显微镜及成相系统（Olympus），透射电子显微镜及成像系统（日本JEM1230）.成人腹部大网膜脂肪组织（自兰州军区兰州总医院普通外科无菌手术条件下获取）.　　1.2方法　　1.2.1体外分离培养将脂肪组织清洗、剪碎，加入2倍体积的1g/LⅠ型胶原酶，37℃振荡消化60min，1500r/min离心10

8、min，弃上清，加完全培养液（含100mL/LFBS,100×双抗的HGDMEM培养基）吹打细胞沉淀，过200目细胞筛，37℃,50mL/LCO2,饱和湿度条件下培养.48h后首次换液.生长至70%～80%融合时，2.5g/L胰蛋白酶消化传代.　　1.2.2分组诱导取生长状态良好的第4代ADMSCs，随机分成3组：Ⅰ组加入0.20μmol/LAngⅡ，Ⅱ组加入10μmol/L5aza，孵育24h，PBS洗3次，换完全培养液