vegf165通过mapk信号通路调节upa蛋白表达的实验研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：416523212111南昌大学专业学位研究生学位论文VEGF165通过MAPK信号通路调节uPA蛋白表达的实验研究ThestudyofVEGF165up-regulatestheexpressionofuPAproteinthroughMAPKsignalingpathways黄鹂培养单位（院、系）：南昌大学第二附属医院指导教师姓名、职称：周为民教授/主任医师申请学位的学科门类：医学学科专业名称：外科学（血管外科）论文答辩日期：2015年05月答辩委员会主席：常光其评阅人：胡何节李全明2015年06月01日学位论文独创性声明一、学位论文

2、独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：黄鹂签字日期：2015年06月01日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以

3、将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：黄鹂导师签名（手写）：周为民签字日期：2015年06月01日签字日期：2015年06月01日论文题目VEGF165通过MAPK信号通路调节uPA蛋白表达的实验研究姓名黄鹂学号416523212111论文级别博士□硕

4、士√院/系/所医学院研究生部专业外科学（学挂外科方向）E-mail备注：√公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：本研究通过血管内皮生长因子165(Vascularendothelialgrowthfactor165,VEGF165)刺激人脐静脉内皮细胞(Humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)，检测MAPK信号通路中ERK、p38、JNK的磷酸化水平及尿激酶型纤溶酶原激活物（Urokinase-typeplasminogenactivator,uPA）蛋白表达变化，来研究外源性VEGF16

5、5促进HUVECs细胞uPA蛋白表达的过程中MAPK信号通路的作用。方法：1.验证VEGF165对HUVECs细胞增殖的影响：采用不同浓度的VEGF165（0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、30ng/mL和50ng/mL）培养HUVECs细胞，CCK-8(水溶性四唑盐比色法)检测细胞增殖情况。2.验证VEGF165对uPA蛋白表达的影响：分别以10ng/ml的VEGF165培养液和不含VEGF165的培养液培养HUVECs细胞，24h，48h，72h后采用蛋白质印迹法（Westernblot，WB)法检测各组uPA蛋白的表达。3.验证VEGF165对MAP

6、K信号通路的影响：分别以10ng/ml的VEGF165培养基和不含VEGF165的培养基培养HUVECs细胞，0h、6h、12h及24h后WB检测各组ERK、p38、JNK磷酸化水平。4.确定与uPA蛋白表达相关的MAPK信号通路：为确认ERK信号通路在VEGF165上调uPA蛋白表达过程中的作用，我们应用该通路的特异性阻断剂PD98059干预信号传导，实验分组如下：control组，VEGF165处理组，PD98059预处理1h组，PD98059预处理1h+VEGF165组。WB检测uPA蛋白表达及p-ERK水平；为证实p38信号通路在VEGF165上调uPA蛋白

7、表达过程中的作用，应用该通路的特异性阻断剂SB203580干预信号传导，实验分组同上，WB检测uPA蛋白表达及p-p38水平；为确认JNK信号通路在VEGF165上调uPA蛋白表达过程中的作用，我们应用该通路的特异性阻断剂SP600125干预信号传导，实验分组同上，WB检测uPA蛋白表达及p-JNK水平。5.验证MAPK三条通路的交互关系：分别以50uMPD98059、20uMI摘要SB203580和10uMSP600125作用于HUVECs细胞，并采用WB方法检测各组ERK、p38和JNK磷酸化水平。结果：1.随VEGF165浓度增高，HUVECs细胞的光密度