布鲁氏菌外膜蛋白omp25对mapk信号通路的影响

《布鲁氏菌外膜蛋白omp25对mapk信号通路的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号密级学号：2012108013单位代码：10759石河子大学硕士学位论文布鲁氏菌外膜蛋白OMP25对MAPK信号通路的影响学位申请人刘娟指导教师张辉副教授申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称基础兽医学研究方向动物生理学与生物化学所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2015年6月EffectsofBrucellaoutermembraneproteinOMP25onMAPKsignalingpathwaysAdissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheReq

2、uirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByLiuJuan（BasicVeterinaryMedicine）DissertationSupervisor：ZhangHuiJune，2015Shihezi,Xinjaing,China石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。使用授权

3、声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。课题来源1.国家自然科学基金项目“MAPKs信号通路在布鲁氏菌致炎过程中的分子机制研究”。项目编号：31360610。2.国家自然科学基金项目“布鲁氏菌外膜蛋白OMP25对宿主细胞自噬/凋亡信号通路的调控机制研究”。项目编号：31460650。3.国际科技合

4、作重点项目“新型布鲁氏菌病鉴别诊断技术的联合研发”。项目编号：2015DFR31110。摘要布鲁氏菌病主要引起家畜的流产、死胎、睾丸炎等症状，给畜牧业的生产造成严重的经济损失。布鲁氏菌没有典型的外毒素，其毒力主要表现在对宿主细胞的侵袭力和自身繁殖力上。外膜蛋白是布鲁氏菌的主要毒力因子，与细菌的黏附和定殖密切相关。OMP25蛋白是布鲁氏菌中重要的外膜蛋白，在维持细菌自身结构的稳定性和展现细菌毒力上有重要作用，缺失OMP25蛋白后，布鲁氏菌的毒力明显下降。MAPK信号通路是普遍存在于真核细胞的信号转导通路，可以被病原菌、细胞因子等信号激活，产生应激反应。

5、本实验旨在研究外膜蛋白OMP25与MAPK信号通路的关系，了解外膜蛋白对信号通路的激活情况，以及对细胞因子分泌的影响，为进一步研究布鲁氏菌的致病机制提供理论依据。围绕以上观点开展如下研究：筛选并鉴定布鲁氏菌OMP25缺失株和2308侵染人胚胎滋养层细胞时显著表达的细胞因子。建立布鲁氏菌OMP25缺失株和2308侵染人胚胎滋养层细胞模型，采用ELISA方法检测侵染后0h，8h，24h，48h的细胞上清液中的细胞因子，确定分泌量差异显著的细胞因子。结果显示，OMP25组、2308组和PBS对照组的IL-10，IL-1β在各个时间段的差异均不显著；在侵染4

6、h时，OMP25缺失株侵染组IL-1的释放量显著低于2308侵染组（P＜0.05）；与2308组相比，OMP25组TNF-α的释放量在4h，8h，24h，48h均差异显著。研究表明布鲁氏菌侵染宿主细胞过程中外膜蛋白OMP25与细胞因子TNF-α的释放量密切相关。分析布鲁氏菌OMP25对MAPK信号通路的影响。建立布鲁氏菌OMP25缺失株和2308侵染人胚胎滋养层细胞(HPT-8)模型，收集侵染细胞总蛋白，定量后进行磷酸化检测。用浓度为10μM的信号通路抑制剂孵育细胞1h，用牛种布鲁氏菌布鲁氏菌OMP25缺失株和强毒株2308以100:1的比例侵染细胞

7、。ELISA法检测侵染细胞4h，8h，24h，48h后细胞上清液中的TNF-α的含量，进一步通过阻断实验对其进行验证。结果显示：在26个磷酸化的蛋白中，2308激活了GSK-3a/b、JNK、p38、P70S6Kinase、RSK2、HSP27磷酸化位点。OMP25缺失株激活了p38γ通路相关的蛋白磷酸化位点。抑制实验结果显示，加入p38抑制剂后，OMP25缺失株侵染组与2308侵染组TNF-α分泌量均降低；加入JNK和ERK抑制剂后，OMP25缺失株侵染组中TNF-α变化不明显。研究表明布鲁氏菌OMP25缺失株和布鲁氏菌2308株激活了MAPK信号

8、通路中的p38支路，且TNF-α的产生和p38有关。检测布鲁氏菌OMP25缺失株和2308株感染小鼠时MAP