降钙素对软骨细胞炎症反应及p38mapk信号通路的影响

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1、中图分类号：R365论文编号：HBLG2015-100UDC：密级：公开硕士学位论文降钙素对软骨细胞炎症反应及p38MAPK信号通路的影响作者姓名：严晓苓学科名称：基础医学研究方向：骨关节炎学习单位：华北理工大学学习时间：3年提交日期：2015年4月26日申请学位类别：医学硕士导师姓名：王文雅教授单位：华北理工大学论文评阅人：王献华教授单位：华北理工大学王海涛教授单位：华北理工大学论文答辩日期：2015年6月7日答辩委员会主席：张祥宏教授关键词：骨关节炎；基质金属蛋白酶13；胶原Ⅱ型；降钙素唐山华北理工大学2015年6月TheEffectofCalcitoninonI

2、nflammatoryinChondrocyteandP38MAPKSignalingDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyYanXiaoling(PathologyandPathophysiology)Supervisor:ProfessorWangWenyaJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究

3、工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开

4、及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的本实验通过观察降钙素对白介素1β（IL-1β）诱导的大鼠软骨细胞中基质金属蛋白酶13（MMP-13）、Ⅱ型胶原（ColⅡ）、p38、P-p38及c-myc表达的影响，探讨降钙素是否通过阻断p38MAPK信号通路抑制IL-1β引起的大鼠软骨细胞的炎性损伤。方法体外获得、培养大鼠关节软骨细胞。采用甲苯胺蓝及免疫细胞化学染色方法鉴定软骨细胞。MTT法检测细胞增殖率，确定实验所需降钙素浓度。将第2代软骨细胞分为7组，分别为：A组空白对照组，加入完全培养基；B组I

5、L-1β诱导组，加入含10ng/mlIL-1β的完全培养基；C组降钙素对照组，加入含50ng/ml降钙素的完全培养基；D组IL-1β+降钙素干预组，加入含10ng/mlIL-1β的完全培养基15min后再加50ng/ml降钙素；E组IL-1β+SB203580干预组，加入含10ng/mlIL-1β的完全培养基15min后再加10μmol/LSB203580；F组降钙素+SB203580联合对照组，加入含50ng/ml降钙素和10μmol/LSB203580的完全培养基；G组IL-1β+降钙素+SB203580联合干预组，加入含10ng/mlIL-1β的完全培养基15m

6、in后再加入50ng/ml降钙素和10μmol/LSB203580。24h后做相应处理，用免疫细胞化学染色、WesternBlot观察和检测MMP-13、ColⅡ、p38、P-p38及c-myc的表达情况。结果1甲苯胺蓝和ColⅡ免疫细胞化学染色结果说明体外培养细胞为软骨细胞，能够用来进行下一步实验；2MTT结果提示浓度在50-500ng/ml范围的降钙素对软骨细胞抑制率无显著差异，故实验中的降钙素浓度选取50ng/ml浓度。3WesternBlot结果：1）各组p38表达无显著差异（P＞0.05）；P-p38在B组的表达显著高于其它各组（P＜0.05），在D、E、G

7、组的表达高于A组而低于B组（P＜0.05），D、E、G组间无显著差异（P＞0.05）；2）c-myc和MMP-13在B组的表达显著高于其他各组（P＜0.05），在D、E组的表达高于A组而低于B组（P＜0.05），D、E组间无显著差异（P＞0.05），在G组的表达低于B、D、E组而高于A组（P＜0.05）；3）ColⅡ在B组的表达显著低于其它各组（P＜0.05），在D、E、G组的表达低于A组而高于B组（P＜0.05），D、E、G组间无显著差异（P＞0.05）；各A、C、F组间无显著差异（P＞0.05）。4对MMP-13、ColⅡ、p38、P-p38及c