socs3对iga肾病患者iga1刺激人肾小球系膜细胞增殖的影响及机制探讨

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1、分类号：密级：UDC：学号：406520512419南昌大学硕士研究生学位论文SOCS3对IgA肾病患者IgA1刺激人肾小球系膜细胞增殖的影响及机制探讨ToinvestigatetheeffectandmechanismofSOCS3ontheproliferationofhumanmesangialcellsstimulatedbyIgA1inpatientswithIgAnephropathy黄佳晏培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：陈钦开教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称

2、：内科学（肾内）论文答辩日期：2015年05月答辩委员会主席：评阅人：2015年05月I一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌

3、大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写

4、）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：观察上调细胞因子信号转导抑制因子3（suppressorofcytokinesignaling3，SOCS3）表达对IgA肾病（IgAnephropathy，IgAN）患者血清IgA1刺激人肾小球系膜细胞（humanmesangialcell，HMC）增殖的影响，探讨其可能的机制，从而揭示SOCS3在IgAN肾脏损害中的作用。方法：

5、1)采用Jacalin亲和层析联合SephacrylS-200凝胶过滤法纯化聚合IgAN患者血清IgA1（aIgA1）。2)以HMC为研究对象，通过腺病毒转染技术建立高表达SOCS3的HMC，再以aIgA1刺激HMC。3)确定aIgA1作用时间和浓度及病毒转染条件后，设立4个实验组：a)空白对照组：HMC仅加入10%FBS和1%双抗的1640培养基正常培养，定时换液；b)IgA1组：HMC正常培养后加入aIgA1刺激；c)IgA1+空载腺病毒组：HMC正常培养转染空载腺病毒48小时后加入aIgA1刺激；d)

6、IgA1+SOCS3过表达腺病毒组：HMC正常培养转染SOCS3腺病毒48小时后加入aIgA1刺激；4)采用MTT法检测系膜细胞增殖，Westernblot和Real-timePCR检测各组SOCS3、Toll样受体4（Tolllikereceptor4，TLR4）、转化生长因子β1（Transforminggrowthfactorβ1，TGF-β1）蛋白和mRNA表达情况。5)实验数据采用均数±标准差(xs)表示，通过统计软件IBMSPSSStatistics20进行t检验，结果以p<0.05为有显著性

7、差异。结果：1)aIgA1刺激HMC12h、24h和48h，刺激24h开始表现出明显的促增殖作用，浓度为0.25、0.5、1.0mg/ml与空白对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；II摘要浓度为1.5mg/ml与空白对照组比较，差异无统计学意义。其中浓度为0.5mg/ml作用48h时aIgA1的促增殖作用最为明显。aIgA1刺激后与空白对照组相比，SOCS3、TLR4、TGF-β1蛋白和mRNA表达均有显著升高（p<0.05），差异有统计学意义。2)分别转染SOCS3过表达腺病毒和空载腺病毒48h

8、后，对HMC加入aIgA1进行干预，过表达SOCS3的HMC经aIgA1刺激24h或48h，与IgA1组和IgA1+空载腺病毒组相比，MTT检测发现细胞的增殖程度明显降低，差异有统计学意义（P<0.05），SOCS3对IgA1刺激系膜细胞的增殖反应有一定的抑制作用。提取各组细胞总蛋白和总RNA检测相关蛋白和mRNA表达变化，IgA1+SOCS3过表达病毒组较IgA1+空载腺病毒组及IgA1组SOCS3蛋白和mRN