socs1介导angⅱ促血管平滑肌细胞增殖的作用及机制

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1、分类号：密级：UDC：学号：406520512398南昌大学硕士研究生学位论文SOCS1介导AngⅡ促血管平滑肌细胞增殖的作用及机制SOCS1MediatestheProliferationofVascularSmoothMuscleCellsInducedbyAngⅡandItsPossibleMechanism徐旺培养单位（院、系）：南昌大学第二附属医院指导教师姓名、职称：李菊香教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：内科学（心血管）论文答辩日期：2015年05月答辩委员会主席：葛郁芝评阅人：李鸣媛袁兆康2015年06月一、学位论文独创性声明本人声明

2、所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编

3、入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目SOCS1介导AngⅡ促血管平滑肌细胞增殖的作用及机制姓名徐旺学号406520512398论文级别硕士院/系/所医学院专业内科学（心血管）E_mail备注：□公开□保密（向校

4、学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：探讨细胞因子信号转导抑制因子-1（suppressorofcytokinesignal1ing-1,SOCS1）对血管紧张素II（AngiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的人血管平滑肌细胞（vascularsmoothmusclecell,VSMC）增殖的影响及可能的机制。方法：1）以人脐动脉血管平滑肌细胞（VSMC）为研究对象，建立AngⅡ促VSMC增殖模型。用0mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L等不同终浓度的AngⅡ孵育细胞48h，行MTT检

5、测，得出作用最明显的浓度，以该浓度AngⅡ孵育细胞0h、12h、24h、48h、72h，行MTT检测，得出最佳作用时间。2）最佳作用浓度AngⅡ分别刺激VSMC0h、12h、24h、48h、72h，DCFH-DA探针检测活性氧（reactiveoxygenspecies,ROS）水平，Western-blot检测SOCS1表达情况。3）设计与合成3对靶向人SOCS1基因的siRNA(SOCS1-siRNA)，实时荧光定量-PCR和Western-blot筛选最佳SOCS1-siRNA。4）用阳离子脂质体将最佳SOCS1-siRNA转染VSMC，给予AngⅡ

6、孵育。实验作2个分组：实验1：空白对照组、SOCS1-siRNA组、AngⅡ组、AngⅡ+SOCS1-siRNA组、Ly294002组、Ly294002+AngⅡ组；（Ly294002为Akt信号通路阻断剂）实验2：空白对照组、SOCS1-siRNA组、天然维生素E组、AngⅡ组、AngⅡ+SOCS1-siRNA组、、天然维生素E+AngⅡ组。(天然维生素E为ROS清除剂)5）用MTT比色法检测细胞增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡率，DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧（ROS）水平，Western-blot技术分别测定SOCS1、凋亡相关基因Bax和Bc

7、l-2、Akt信号通路蛋白总Akt、p-Akt的表达。6）数据以均数±标准差（xs）表示，用SPSS17.0软件分析数据，P＜0.05认为差异有统计学意义。II摘要结果：1）10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L的AngⅡ均可促进VSMC增殖，其中10-7mol/L浓度的AngⅡ作用最明显；用10-7mol/L的AngⅡ刺激VSMC0h、12h、24h、48h、72h，其促增殖的作用在48h内表现为时间依赖性，刺激72h时的其促增殖作用与48h无明显差异。选取10-7mol/L的AngⅡ刺激VSMC48h用于后续实

8、验。2）AngⅡ促进VSMC内ROS生成及SOCS1表达。3）成功