sirna介导的nk细胞kir2dl3受体抑制对人肝星状细胞的影响分析

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1、学位论文Ｓ瓜ＮＡ介导的ＮＫ细胞ＫＩＲ２ＤＬ３受体抑制对人巧皇状细胞的影响分析乂ｎａｌｓｉｓｏｆ化ｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｎｈｉｂｉｔｅｄＮＫｃｅｌｌＫＩＲ２ＤＬ３ｉｎｄｕｃｅｄｙＩ．．ｂｓｉＲＮ乂ｏｎｈｕｍａｎｈ巧ａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓｙ江婷指导教师姓名：李辟申请学位级别：硕±专业名称：中西医结合临床论文提交时间：２０１５年４月论文答辩时间：２０１５年Ｓ月二〇—五年五月成都中医药大学硕±学位论文中文摘要目的：通过特异性沉默ＮＫ细胞ＫＩＲ２ＤＬ３受体表达

2、，分析抑制性受体ＫＩＲ２ＤＬ３与ＮＫ细胞活性相关性默后ＮＫ细胞与人ＨＳＣｓ细胞系ＬＸ－２细胞株共同培养，；沉分析抑制ＫＩＲ２ＤＬ３受体的表达后，ＮＫ细胞对活化的人ＨＳＣｓ调亡的影响是否发生改变。Ｗ期深入认识ＮＫ细胞抑制慢性ＨＣＶ感染者肝纤维化的分子机制。方法：取随机抽取的４８例健康汉族人及１０例慢性ＨＣＶ感染患者外周血样本，进行ＮＫ细胞分离，鉴定ＮＫ细胞ＫＩＲ２ＤＬ２及ＫＩＲ２ＤＬ３基因型，分析并分选出携３基。利用ＲＮＡ．带ＫＩＲ２ＤＬ因的样本个体ｉ技衣将ＳｈＲＮＡ片段插入ＰＬＫ０１载体中，脂质体转染方法将包装质粒共同转染到２９

3、３Ｔ细胞，收集上清中的慢病毒，ｉ将慢病毒与ＮＫ细胞共同解育，特异性ｓＲＮＡ沉默ＫＩＲ２ＤＬ３的基因表达。ｓｓ－ｉＲＮＡ转染后的服细胞与人ＨＳＣ细胞系ＬＸ２细胞株共同培养，分析特异性ｓｉＲＮＡ沉默ＫＩＲ２ＤＬ３基因，抑制ＫＩＲ２ＤＬ３受体的表达后，ＮＫ细胞对活化的人ＨＳＣｓ调亡的影响是否发生改变，分析ＮＫ细胞的抗肝纤维化作用的分子机制。结果：我们发现５８例样本中－，ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ２等位基因ＫＩＲ２ＤＬ３２ＤＬ３纯合子形式为常见，ＫＩＲ２ＤＬ３基因型占总样本量的％．６％。此外，我们分析运用ＲＮＡ干扰技术可实现对ＫＩＲ２

4、ＤＬ３基因的沉默。ＳｉＲＮＡ转染后的ＮＫ细胞与－－２细胞株共同培养２细。人ＨＳＣｓ细胞系ＬＸ，检测ＬＸ胞调亡情况我们发现，ＫＩＲ２ＤＬ３受体的表达抑制后，ＮＫ，ＮＫ细胞的活性増高细胞对活化的人ＨＳＣｓ调亡抑制增强，可能对减轻肝纤维化有砍极作用。结论：通过实验，我们发现抑制ＫＩＲ２ＤＬ３受体表达能增强ＮＫ细胞活性，提高对ＨＳＣｓ的杀伤效率，可能对减轻慢性ＨＣＶ感染者的肝纤维化有积极作用。■关键词■丙型肝炎病毒ＩＲ２ＤＬ３基因；人肝星状细胞。；自然杀伤细胞；Ｋ１成都中医药大学硕±学位论文ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｅｃｔｉ

5、ｖｅ：ｊＴｈｉｓＫｓｅａｒｃｈｄｉｓ州ｓｓｅｄ化ｅｓｉｌｅｎｃｅｄＫＩＲ２ＤＬ３ｏｆＮＫｃｅｌｌｂＲＮＡｉ，ａｎｄ化ｅｙｒｅ－ｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＫＩＲ２ＤＬ３ａｎｄ也ｅｖｉｔａｌｉｔｏｆＮＫｃｅｌｌ．ＩｎｃｕｂａｔｅＮＫｃｅｌｌｗｉｔｈＬＸ２ｙｂｏｔｉｈｂｅｆｏｒｅａ打ｄａｆｔｅｒｔｈｅｓｉｌｅ打ｃｅｏｆ化ｅＫＩＲ２ＤＬ３．ＤｉｓｃｕｓｓｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｗｅｔｈｅｒｔｈｅｖｉｔａｌｉｔｙｏｆＮＫｃｅｌｌａｎｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎＨＳＣｓｗｏｕｌ

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7、ｄｅｃｔｅｄｆｒｏｍｈｅａｌｔｈｙｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓａｎｄ１０ＨＣＶｉｎｆｅｃｔｅｄｐａｔｉｅ打ｔｓ．Ｔｈｅ打ｗｅｇｅ打ｅｔｙｐｅＫＩＲａｎｄｃｏｌｌｅｃｔ化ｏｓｅｗｈｏａｒｅＫＩＲ２ＤＬ３ｐｏｓｉｔｉｖｅ．Ｔｈｅ打ｗｅｓｉｌｅｎｃｅｄｔｈｅＫ－－ＩＲ２ＤＬ３ｂｙｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｍｅｄｉａｔｅｄｄｅｌｉｖｅｒ．ｌｉｎｃｕｂａｔｅＮＫｃｅｌｌｗＵｈＬＸ２ｂｏ化ｂｅｆｏｒｅｙａｎｄａｆｔｅｒ化ｅｓｉｌｅ打ｃｅｏｆｔｈｅＫＩＲ２ＤＬ３．Ｔｈｅｎｗｅａｎａｌｙｓｅｄｗｅｔ

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