桂莪术提取物对人肝星状细胞的影响.pdf

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1、世界科学技术一中医药现代化★中医研究桂莪术提取物对人肝星状细胞的影响六刘雪梅，张园，韦燕飞(广西中医药大学基础医学院南宁530021)摘要：目的：观察桂莪术提取物对肝星状细胞株(HSC—LX：)增殖、胶原生成以及基质金属蛋白酶表达的影响。方法：HSC—LX2培养于含10％胎牛血清的DMEM培养液中，用终浓度分别为0、22．5、45、90mol·L的桂莪术提取物处理24h后，MTF法测定细胞增殖抑制率；LDH比色法检测桂莪术提取物对HSC—LX2的细胞毒性；ELISA法检测HSC—LX2I型胶原表达的影

2、响；WesternBolt法检测HSC—LX2基质金属蛋白酶一1(MMP一1)蛋白表达。结果：MTF结果显示，22．5、45、90p~mol·L的桂莪术提取物均能抑制HSC—LX2细胞增殖，呈剂量依赖性，抑制率分别为16．2％，43．9％，59．4％，IC5o为59．1p~mol·L一；桂莪术提取物各剂量组培养上清液中LDH活力差异无显著性；45、90Ixmol·L桂莪术提取物可显著降低I型胶原的表达(P<0．01)；WesternBlot结果分析显示，45、90I~mol·L桂莪术提取物可显著提高H

3、SC—LX2MMP一1蛋白的表达(P<0．05)。结论：桂莪术提取物可能通过抑制HSC—LX：增殖和I型胶原合成，提高MMP—l蛋白表达，发挥抗肝纤维化作用。关键词：桂莪术提取物肝星状细胞细胞增殖胶原表达doi：10．1l842／wst．2014．04．017中图分类号：R285．5文献标识码：A中药桂莪术为姜科姜黄属植物广西莪术(Cur—星状细胞株(HepaticStellateCells—LX2，HSC—LX2)增cumakwangsiensisS．LeeetC．F．Liang)的干燥根殖、胶原生

4、成以及基质金属蛋白酶(MatrixMetallo—茎，是药典收载的中药莪术的三大品种之一，主要proteinases，MMPs)表达的影响，从细胞分子层面探分布于我国广西省。其性温味辛苦，归肝脾经，具有讨桂莪术提取物抗肝纤维化的作用机制。行气破淤、消肿止痛之功效，常用于淤血经闭，肝脾1材料与方法肿大、跌打损伤等病症。实验研究发现莪术具有抗肾间质纤维化、肝纤维化作用。熊振芳等[4J研究1．1细胞来源提示，莪术提取物对肝纤维化的干预作用，可能通HSC—LX由中南大学湘雅医学院医学实验中过抑制肝星状细胞(H

5、epaticStellateCells，HSCs)的心提供。增殖和细胞外基质(ExtracellularMatrix，ECM)的合1．2药物制备成，从而降低ECM在肝内的沉积。5莪术粉碎加工成细粉，用体积分数为95％为进一步阐明莪术治疗肝纤维化的作用机制，的乙醇进行渗漉提取，至无色后，静置24h，滤网滤本文通过体外细胞实验，观察桂莪术提取物对人肝过后，将提取液减压浓缩成浸膏，回收乙醇，再以适量水稀释，得到桂莪术提取物的溶。收稿日期：2013—11—21修回日期：2013—12-20★国家自然科学基金委

6、地区项目(81260675)：白花丹醌干预肝癌血管新生及其信号调控研究，负责人：韦燕飞；广西中医药管理局中医药科技专项(GZKZ10-049)：白花丹醌对瘦素刺激人肝星状细胞JAK2一STAT3信号转导通路的影响，负责人：韦燕飞；广西中医药大学校级课题(P2008018)：桂莪术提取物对人肝星状细胞作用的研究，负责人：韦燕飞。★★通讯作者：韦燕飞，医学博士，副教授，主要研究方向：中医药抗肝纤维化基础研究。[WorldScienceandTechnology~ModernizationofTraditi

7、onalChineseMedicineandMateriaMedica]7802014第十六卷第四期*Vo1．16No．41．3主要试剂按LDH测试盒测试步骤进行。十二烷基磺酸钠、三羟甲基氨基甲烷、丙烯酰1．4．5ELISA法检测I型胶原表达胺、聚丙烯酰胺、过硫酸铵(Bio—rad公司)；胎牛血根据ELISA试剂盒的检测方法，检测桂莪术提清(Hyclone，Bioworld公司)；噻唑蓝(MTI"，Amerisco，取物HSC—LXI型胶原含量。武汉博士德公司分装)；I型胶原试剂盒(Bioworld公

8、1．4．6WesternBolt法检测MMP—l蛋白表达司)；基质蛋白酶一1(MatrixMetalloproteinases一1，细胞培养及药物干预同上，参照文献_6]制备蛋MMP一1)兔抗小鼠单克隆抗体(Bioworld公司)。白提取液后用Lowry法检测蛋白浓度，然后进行1．4方法6％SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳，待电泳完毕后电转1．4．1细胞培养移蛋白至硝酸纤维素膜上，膜在室温下用含5％脱将冷冻保存于超低温冰箱中的HSC—LX复苏脂奶粉的TBST缓