rip1激酶参与缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞增生及胶质瘢痕的形成

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1、nASOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目RIP1激酶参与缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞—增生及胶质瘢痕的形成研究生姓名李忠胜指导教师姓名张慧灵专业名称药理学研究方向脑血管药理苏仲丨大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外’本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律

2、责任。论文作者签名：日期：^h苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年—月解密后

3、适用本规定。非涉密论文口日期：^RIP1激酶参与缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞增生及胶质瘢痕的形成中文摘要RIP1激酶参与缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞增生及胶质瘢痕的形成中文摘要目的：研究necroptosis死亡的关键激酶RIP1K（receptorinteractionprotein1kinase,RIP1K）在缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成中的作用，并研究其作用机制是否与调节星形胶质细胞的VEGFD-VEGFR3信号通路有关。方法：采用大鼠短暂性大脑中动脉阻塞（transientmiddlece

4、rebralarteryocclusion,tMCAO）方法，建立大鼠星形胶质细胞增生及胶质瘢痕模型。模型前5天侧脑室注射慢病毒沉默RIP1K基因，以脑萎缩体积、行为学症状等指标评价大鼠脑中风后期的神经功能恢复情况。采用原代培养的新生大鼠皮层星形胶质细胞氧糖剥夺（oxygen-glucosedeprivation,OGD）再灌注的方法，建立体外星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成的细胞模型。星形胶质细胞与神经元co-culture法检测RIP1K基因沉默对神经元轴突的影响。LDH方法检测OGD再灌注诱导的星形胶质细胞乳酸脱氢酶

5、漏出率。免疫荧光法、westernblot法检测体内体外缺糖缺氧再灌注对星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成的标志蛋白GFAP、neurocan以及phosphacan表达情况。Westernblot法及免疫荧光法观察星形胶质细胞RIP1K、VEGFD、VEGFR3表达情况。结果：术前5天给予RIP1K基因沉默病毒可有效减少tMCAO诱导的大鼠胶质瘢痕的形成，减少脑中风28天后脑萎缩体积（P＜0.01）,及改善行为学症状（P＜0.01）。Westernblot结果显示：tMCAO后皮层缺血区胶质瘢痕标志蛋白GFAP、neuro

6、can、phosphacan以及RIP1K表达上调（P＜0.01）。在RIP1K基因沉默后，免疫组化显示shRIP1K可抑制皮层缺血区胶质瘢痕标志蛋白GFAP、neurocan、表达上调以及VEGFD、VEGFR3表达的上调（P＜0.01）。在星形胶质细胞氧糖剥夺再灌注的体外星形胶质细胞增生及胶质瘢痕模型，WesternBlot结果显示：星形胶质细胞在OGD再灌注后，胶质瘢痕的标志蛋白GFAP、neurocan、phosphacan以及RIP1K、VEGFD、VEGFR3表达上调（P＜0.01），Elisa结果显示：在星

7、形胶质细胞OGD/再灌注后，星形胶质细胞以及培养基中VEGFD表达较正常组均增加。RIP1K基因沉默可对抗I中文摘要RIP1激酶参与缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞增生及胶质瘢痕的形成OGD/再灌注引起的星形胶质细胞GFAP、neurocan、phosphacan、RIP1K表达变化，并减少VEGFD、VEGFR3表达的上调（P＜0.01）。在星形胶质细胞OGD/再灌注胶质瘢痕模型与神经元共培养系统中，LDH结果显示：RIP1K基因沉默可以抑制OGD/再灌注诱导的细胞乳酸脱氢酶漏出率（P＜0.01），促进神经元轴突的延伸（

8、P＜0.01）。结论：1.抑制RIP1K可以促进缺血性脑中风后期神经功能的恢复，其作用可能与RIP1K基因沉默抑制星形胶质细胞增生及胶质瘢痕的形成有关。2.RIP1基因沉默抑制胶质瘢痕的形成的机制可能与抑制VEGFD-VEGFR3信号通路有关。关键词：脑缺血；RIP1K；星形胶质细胞；胶质瘢痕；OGD；tMCAO作者