缺血性脑中风诱导星形胶质细胞死亡的自噬-cathepsins-caspase信号机制

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1、硕士学位论文论文题目缺血性脑中风诱导星形胶质细胞死亡的自噬-Cathepsins-Caspase信号机制研究生姓名罗宇指导教师姓名张慧灵（教授）专业名称药理学研究方向神经药理论文提交日期2013年4月缺血性脑中风诱导星形胶质细胞死亡的自噬-Cathepsins-Caspase信号机制中文摘要缺血性脑中风诱导星形胶质细胞死亡的自噬-Cathepsins-Caspase信号机制中文摘要目的：研究缺血性脑中风诱导星形胶质细胞死亡的自噬-Cathepsins-Caspase信号机制。方法：采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞(per

2、manentmiddlecerebralarteryocclusion,pMCAO)方法，建立脑缺血的大鼠模型。大鼠脑缺血后立即侧脑室注射自噬特异性抑制剂3-MA（3-Methyladenine），以WesternBlot方法检测3-MA对缺血皮层区Cathepsins-Caspase通路相关蛋白表达的影响。采用原代培养的新生大鼠皮层星形胶质细胞缺氧缺糖(oxygen-glucosedeprivation，OGD)方法，建立脑缺血的细胞模型。LDH法检测OGD诱导的星形胶质细胞乳酸脱氢酶漏出率。免疫组织化学方法和We

3、sternBlot方法检测OGD诱导的原代培养星形胶质细胞中CathepsinB，CathepsinL和Caspase3蛋白的时程变化以及3-MA对Cathepsins-Caspase通路相关蛋白表达的影响。结果：在脑缺血大鼠模型中，WesternBlot结果显示，给予3-MA干预之后，缺血皮层区CathepsinB、CathepsinL、Bid、Caspase3蛋白激活减少(P0.01)，线粒体Cyt-c(Cytochrome-c)向胞浆的转移减少(P0.01)，说明3-MA能有效的抑制缺血皮层区Catheps

4、ins-Caspase通路相关蛋白的表达。LDH结果显示，3-MA(0.1-1mM)能降低星形胶质细胞OGD12h后LDH的漏出率(P0.05,P0.01)。免疫组织化学结果显示原代星形胶质细胞OGD处理后CathepsinL、CathepsinB、Caspase3分别在3h、6h、12h显著激活，给予3-MA（1mM）处理后三者表达均下调。WesternBlot结果显示，原代培养的星形胶质细胞OGD后Cathepsins-Caspase通路相关蛋白明显激活(P0.01)；给予3-MA（1mM）干预之后，act

5、ive-CathepsinB、active-CathepsinL、tBid、active-Caspase3蛋白下调(P0.01)，线粒体Cyt-c向胞浆转移减少(P0.01)，说明3-MA能有效的抑制OGD诱导的星形胶质细胞Cathepsins-Caspase通路相关蛋白的表达。I中文摘要缺血性脑中风诱导星形胶质细胞死亡的自噬-Cathepsins-Caspase信号机制结论：1.自噬特异性抑制剂3-MA能够抑制pMCAO大鼠缺血皮层区Cathepsins-Caspase通路相关蛋白的表达。2.自噬特异性抑制剂3

6、-MA能够对抗OGD诱导的原代星形胶质细胞损伤，并抑制OGD诱导的Cathepsins-Caspase通路相关蛋白的表达。3.缺血缺氧损伤诱导的星形胶质细胞自噬激活通过Cathepsins-Caspase信号通路引起星形胶质细胞死亡。关键词：自噬；Cathepsins-Caspase通路；3-MA；脑缺血；星形胶质细胞作者：罗宇指导导师：张慧灵教授IIAutophagy-Cathepsins-Caspasepathwaycontributestocelldeathofastrocytesinducedbycerebr

7、alischemiaAbstactAutophagy-Cathepsins-CaspasepathwaycontributestocelldeathofastrocytesinducedbycerebralischemiaAbstactAim:ToinvestigatetheroleofAutophagy-Cathepsins-Caspasepathwayoncelldeathofastrocytesinducedbycerebralischemia.Methods:Permanentmiddlecerebralar

8、teryocclusion(pMCAO)modelwasinducedbyusingintraluminalfilamenttechniqueinrats.Theautophagicspecificinhibitor3-MA(3-Methyladenine)wasinjectedintracerebroventricularly(icv)aft