pitx2各亚型在调控人表皮干细胞向成釉质细胞分化的作用

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4、ｌ，．．‘古ｆ方方．：＇一一ｒ／Ｖ：？中文摘要中文摘要牙齿是由上皮和间充质细胞相互诱导形成，其发育过程大致分为五个阶段，分别是牙板期、帽状期、钟状期和分泌期，每个发育阶段需要多个信号分子、蕾状期的相互作用和相互诱导。成体牙齿的不可再生性使得牙齿再生的研究工作具有重要的科研价值。牙齿的不可再生性主要体现在成体牙齿损坏后无法自行修复，因此后期工作中也无法用成体牙齿的相关细胞进行牙齿再生研究。而寻找间充质来源的细一，＾胞这个问题已经基本得到解决因此我们的主要工作是找到种可（＾＜替代外胚层来源的牙上皮细胞的干细胞，对于上皮来

5、源的干细胞而言，成体干细胞相较于胚胎干细胞从取材上有相当大的优势。目前已有研究表明，成体干细胞中的人表皮干细胞可Ｗ替代外胚层来源牙上皮细胞，人表皮干细胞加入外源蛋白ＦＧＦ８与具有诱导功能的Ｅ１３．５小鼠牙脏间充质重组，移植裸鼠肾囊膜下培养２０天，能够形成嵌合体牙＾齿？，经鉴定后人表皮干细胞可＾＾向成釉质细胞方向分化，但是成牙成釉率较低，分一些关键因子的缺少析其原因可能是由于人表皮干细胞向成釉质细胞分化的。而Ｐ一ＩＴＸ２基因在牙庇上皮细胞中强烈表达，是牙上皮的标志性基因之，参与调控牙歴上皮细胞的分化；而且Ｐ打Ｘ２基因是ＦＧＦ８的下游基因。本研究

6、利用慢病毒表达系统在人表皮干细胞中过表达ＰＩＴＸ２基因，为提高诱导人表皮十细胞向成釉质细胞分化的效率奠定基础。本研究首先鉴定Ｐ打Ｘ２Ｈ种亚型在人牙上皮中同时表达，分别是巧和ＡＴＺ２Ｃ。其次，ｔｉｌ人包皮为材料分离得到人表皮干细胞，并通过免疫组化技术鉴定人表皮干细胞相关表面抗原。然后分别构建巧ＴＺ２Ｈ种亚型的慢病毒载体，几种，亚型的慢病毒分别感染人表皮干细胞为了保证感染效率，筛选有绿色巧光蛋白表达的人表皮干细胞单克隆细胞并扩大培养。将过表达ＰＩＴＸ２Ｈ种亚型的人表皮干细胞分别与Ｅ１３．５小鼠牙胚间充质进行重组，移植裸鼠腎囊膜下培养２０天

7、后，重组块进行脱水包埋处理后鉴定。利用ＨＥ和ＡＺＡＮＷ及免疫组化技术鉴定，免疫组化技术检测嵌合体牙齿中ＤＳＰＰ、Ａｍｅｌｏｂｌａｓｔｉｎ、Ａｍｅｌｏｇｅｎｉｎ表达情况。结果表明，成牙一戶率和成釉率最高的组是ＫＳＣ／７Ｔ２ａ＋Ｅ１３．５Ｍｅｓ重组，成牙率为６４．３％，成釉率（）为８８．９％。过表达户／ｒＺ２ａ在人表皮干细胞，提高了其向成釉质细胞方向分化效率。／７Ｘ２ｃ而和ｆ对于人表皮干细胞向牙上皮细胞分化作用不大，送也说明Ｉ福建师范大学刘英硕－上学位论文ＰＩＴＸ２基因中尸／ｒＺ２ａ这个亚型在调控牙胚上