去分化来源表皮干细胞与在体表皮干细胞之间的差异分析

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1、·17·感染、炎症、修复2010年3月第11卷第1期·论著·去分化来源表皮干细胞与在体表皮干细胞之间的差异分析孙晓艳付小兵刘惠玲(解放军总医院基础医学研究所，北京100853)【摘要】目的：比较去分化来源的表皮于细胞与在体表皮干细胞之间的异同点。方法：采用碱性成纤维细胞诱导因子(bFGF)诱导表皮细胞去分化形成表皮干细胞；由人包皮分离、培养在体表皮干细胞。采用免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、细胞染色体核型检测技术及逆转录一聚合酶链式反应法(RT-PCR)观察去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞之间细胞表面标志蛋白表达、细胞亚群及染色体核型等方面

2、的差异。结果：免疫细胞化学染色结果表明，去分化来源的表皮干细胞能够表达表皮干细胞及其亚群特异性的表面标志蛋白，如融整合素、角蛋白19(CK19)、CK14等，而CKlO的表达为阴性。流式细胞技术检测结果显示去分化来源的表皮干细胞及在体表皮干细胞中％叶。CD71一、qCD71及CD71表达阳性的细胞亚群分别占被检测细胞总数的22．8、68．14、0及45．39、33．110／0、0．02细胞染色体核型检测分析结果显示去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞的染色体均为23对、46条，核型正常。此外，RT-PCR检测结果表明去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干

3、细胞中融整合素、CK19、CK14及CK10的mRNA表达水平差异无显著性。结论：去分化来源的表皮干细胞和在体表皮干细胞之间存在着细胞亚群的分布差异，提示其具有更强的增殖能力；二者在细胞核型和表面标志蛋白表达等方面具有相似性。去分化来源的表皮干细胞可以作为表皮干细胞的替代细胞应用于皮肤重建与再生的相关研究。关键词表皮干细胞去分化免疫细胞化学流式细胞检测RT—PCRComparisonbetweenindigenousepithelialstemcellsandinducedepidermalstemcellsbydedifferentiationofe

4、pithelialcellsSunXiaoyan，FuXiaobing，LiuHuiling．InsitituteofBasicMedicalScience，ChinesePIAGeneralHospital，Beijing100853，ChinaCorresp0ndingauthor：FuXiaobing(E-mail：fuxb@cgw．net．cn)Abstract0bjective：Toinvestigatethedifferencebetweenindigenousepithelialstemcellsandthoseinducedfromde

5、differentiationofepithelia1cellswithbasicfibroblastgrowthfactor(bFGF)，andlookforapossibilitytousededifferentiatedinducedepiderma1stemcells(iESCs)inwoundrepairandregenerationofskintissues．Meth-ods：Humanepidermalkeratinocytes(HEKs)werecultivatedandinducedtOreversetheirdifferentiat

6、edprocessandproduceimmature，stem-likecells(dediferentiationinducedepidermalstemceils，iESCs)bybFGFinvitro．Indigenousepidermalstemcells(ESCs)wereisolatedfromhumanforeskinandcultured．Immunochemicalstai—ning，flowcytometricanalysis，karyotypeanalysisandreversetranscription-polymerasec

7、hainreaction(RT—PCR)analysiswereusedtOdetectthedifferencesintheexpressionofmarkerprotein，subpopulationandkaryotypebe-tweeniESCsandESCs．Results：ImmunocytochemicalanalysisprovedthatiESCswerepositivefor131integrin。ker-atin19(CK19)andCK14。yetnegativefortheexpressionofCK10，theestabli

8、shedmarkersofdifferentiatedcells．Flowcytometric